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- 文献和实验
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PCL-TK-PEI-FA
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文献和实验作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA 比超螺旋DNA 转入量低但整合率高。 外源DNA 整合到染色体中概率很小,大约1/104 转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移 酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B 磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细 胞系。 转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA 与转染 试剂 比例,细胞数量,培养及检测 时间等。一些传统的转染技术,如DEAE 右旋
比超螺旋DNA 转入量低但整合率高。外源DNA 整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA 与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等。一些传统的转染技术,如DEAE右旋糖苷法,磷酸钙法,电穿孔法,脂质体法各有利弊,其主要原理及应用特点见下表
,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如 荧光蛋白 ,β半乳糖苷酶等来帮助检测.后者也称稳定转染,外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在.尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高.外源DNA整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系.
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