艰难梭菌(TCD-B)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

艰难梭菌(TCD-B)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

基本信息
产品名称：艰难梭菌（TCD‑B）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
英文名称：Diagnostic Kit for Clostridiumdifficile tcd-B gene （Real-Time PCR Method）
样本类型：粪便（水样 / 不成形）、直肠拭子等
用途：本试剂盒适用于检测从水样粪便等标本中分离出的毒素 B 型艰难梭菌，用于艰难梭菌的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

包装规格
包装规格    50T/盒
TCD-B 反应液    500μL×2 管
酶液    50μL×1 管
TCD-B 阳性质控品    50μL ×1 管
阴性质控品    250μL ×1 管

检验原理
本试剂盒用一对艰难梭菌毒素 B 基因特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对艰难梭菌毒素 B 基因进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染病料的病原学检测。

储存与有效期
储存条件：−20 ℃±5 ℃，避光；避免反复冻融（≤5 次）
有效期：12 个月（未开封）

适用仪器
ABI7500、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

操作流程
样本处理：粪便均质化，提取基因组 DNA（磁珠法 / 快速释放法）。
体系配制（25 μL）：
PCR 反应液：20 μL
模板 DNA：5 μL（阴 / 阳性对照各加 5 μL 对应质控品）
扩增程序：
95 ℃预变性：3 min
40 个循环：95 ℃ 15 s → 60 ℃ 30 s（荧光采集）
结果判读：
阳性：检测通道 Ct 值≤40，且曲线有明显的指数增长曲线；
阴性：样本检测结果 Ct 值>40 或无 Ct 值。

注意事项
1.    所有操作严格按照说明书进行；
2.    试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
3.    反应液应避光保存；
4.    反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5.    使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6.    样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7.    实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8.    试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。