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上海圻明
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30mL
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文献和实验盖玻片的洁净非常重要。经伽马射线处理的盖玻片应为免疫荧光的首选材料(但价格昂贵),普通的生物研究者可以 google 一下简单但硅烷化处理 protocol,提前处理好盖玻片(使盖玻片表面疏水且带有正电荷),对于有高分辨率要求的荧光实验,此步骤非常关键。3、荧光图片的保存常用的荧光图片保存方法抗荧光淬灭剂必不可少,笔者觉得 DAKO 和 invitrogen 的抗荧光淬灭剂非常好用,比较起来,invitrogen 的性价比更高。国产的抗荧光淬灭剂目前还没有试到特别好用的品牌。除了抗淬灭剂外,手动
PBST, 在摇床上缓慢摇动洗涤5 min,共洗涤3次。 5. 荧光二抗孵育 用吸水纸吸尽洗涤液后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中孵育1h后,回收二抗,接着用PBST洗3次,每次5 min;由于荧光容易淬灭,故从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都要避光。 6. 复染核(定位的关键) 在玻片上滴加DAPI,并注意避光孵育5min,对标本进行染核,然后用PBST洗3次,每次5min,洗去多余的DAPI。 7. 封片 用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察
一、石蜡切片和冰冻切片的比较? 1、要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片,这是我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。 2、冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构,可能会使抗原弥散;切片厚度较石蜡的厚,做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时,目录上都写着做什么样的切片,如果它写着只能做冰冻,就不能做石蜡,如写
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