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- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海抚生
- 库存:
20
- 灵敏度:
0.078ng/mL
- 样本:
血清,血浆,细胞培养上清及其他生物学样本
- 标记物:
血清/血浆
- 适应物种:
大鼠、小鼠、人、植物
- 应用:
ELISA试剂盒
- 检测方法:
ELISA法
- 检测范围:
0.156ng/mL-10ng/mL
- 规格:
48T/96T
| 规格: | 48T | 产品价格: | ¥1500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 96T | 产品价格: | ¥2200.0 |
| 产品名称 | 人LIM衰老细胞抗原样域蛋白1(LIMS1)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Human LIMS1 ELISA Kit |
| 灵敏度 | 0.078ng/mL | 检测范围 | 0.156ng/mL-10ng/mL |
| 产品货号 | A114757 | 用途 | 仅供科研研究实验 |

通过特异性抗人LIMS1单克隆抗体包被于微孔板,与样本中的LIMS1结合形成固相抗体复合物。加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的检测抗体后,形成“捕获抗体-LIMS1A-检测抗体”的三明治结构。经洗涤去除未结合物质,加入TMB底物显色,HRP催化TMB产生蓝色产物,在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
数据及参考曲线:

| 校准品浓度(ng/ml) | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.16 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.680 | 1.540 | 0.838 | 0.493 | 0.368 | 0.155 | 0.093 | 0.025 |
| 校正OD值 | 2.655 | 1.515 | 0.813 | 0.468 | 0.343 | 0.130 | 0.068 | 0.000 |


该方法采用双抗体夹心ELISA技术:
微孔板预先包被特异性抗人LIMS1单克隆抗体(捕获抗体);
加入待测样本后,样本中的LIMS1与固相抗体结合;
随后加入生物素化或HRP标记的检测抗体,形成“捕获抗体-LIMS1A–检测抗体”复合物;
洗涤后加入HRP标记的亲和素(若使用生物素-亲和素系统),再加入TMB底物显色;
HRP催化TMB生成蓝色产物,酸性终止液使其变为黄色;
在450nm波长下测定吸光度(OD值),颜色深浅与LIMS1胰淀素浓度呈正比,通过标准曲线计算浓度。
公司正在出售的产品:
| 人肺大静脉平滑肌细胞 | 人泛素蛋白D(UBD)ELISA试剂盒 |
| 小鼠肾皮质上皮细胞 | 人Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)ELISA试剂盒 |
| 兔腹膜毛细血管内皮细胞 | 人甘露糖受体(MR)ELISA试剂盒 |
| 人角质形成细胞 | 人泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA试剂盒 |
| 人肺动脉内皮细胞 | 兔He4elisa试剂盒 |
| 小鼠肾实质细胞 | 人Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒 |
| 兔冠状动脉成纤维细胞 | 人干扰素诱导T细胞趋化因子(ITAC/CXCL11)ELISA试剂盒 |
| 人颈动脉内皮细胞 | 兔TIMP-3elisa试剂盒 |
| 人结肠成纤维细胞 | 人肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)ELISA试剂盒人LIM衰老细胞抗原样域蛋白1(LIMS1)ELISA试剂盒 |
| 人肺小动脉平滑肌细胞 | 人Apelin 36(AP36)ELISA试剂盒 |
| 小鼠肾脏上皮细胞 | 人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)ELISA试剂盒 |
| 兔肺小动脉平滑肌细胞 | 兔CCL3(MIP-1α)elisa试剂盒 |
| 人淋巴结成纤维细胞 | 人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)ELISA试剂盒 |

一.加样孵育
每孔精准加入 100μL 对应标准品 / 待测样本,空白孔加等量样本稀释液;贴封板膜密封微孔板,置于 37℃恒温孵育箱,避光孵育 90min,保证抗原抗体充分结合。
二.首次洗板
轻柔弃去孔内液体,吸水纸上快速拍干;每孔加满洗涤工作液,静置浸泡 30s,甩干拍净;重复洗涤5 次,彻底去除未结合杂质,降低背景值。
三.加酶结合物孵育
除空白孔外,每孔加入 100μL HRP 标记特异性检测抗体;轻微水平晃板混匀,重新封板,37℃避光恒温孵育 60min。
四.二次洗板
重复上述洗板操作 5 次,严格拍干孔内残留液体,杜绝残留洗液造成假阳性、数据偏差。
五.底物显色
避光条件下,每孔加入 90μL TMB 底物显色液,轻柔混匀;37℃避光精准孵育 10~15min,此时液体逐步显现蓝色,显色深浅与待测物含量正相关。
六.反应终止
严格遵循加样顺序,每孔快速加入 50μL 酸性终止液,轻晃微孔板充分混匀,蓝色即刻转为黄色,终止酶促显色反应。
七.上机读数检测
加终止液后15min 内,用酶标仪测定各孔 450nm 波长吸光度(OD 值);以标准品浓度为横坐标、OD 值为纵坐标绘制标准曲线,拟合方程计算待测样本目标蛋白浓度。
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文献和实验液,常用的HRP反应终止液为硫酸,其浓度按加量及比色液的最终体积而异,在板式ELISA中一般采用2mol/L。 二、ELISA试剂盒的包被方式 将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。换言之,包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用于。这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的,大分子蛋白质较小
或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。 大部分ELISA 检测以血清标本为主。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以 HRP 为标记的 ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。 血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性 HRP,也会
酶的ELISA试剂盒中使用的洗板液一般为含0.05% Tween20的中性PBS,Tween20为一种非离子去垢剂,既含亲水基团,也含疏水基团,其在洗涤中的作用机理是,借助其疏水基团与经疏水性相互作 用被动吸附于聚苯乙烯固相上蛋白的疏水基团形成疏水键,从而削弱蛋白与固相的吸附,同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下,促使蛋白质脱离固相而进 入液相,这样就可达到去掉非特异吸附物的目的,但由于抗体或抗原的包被通常也是通过在碱性条件下与固相的疏水性相互作用而被动吸附于固相,因此要注意非离 子去垢剂的使用
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