olink蛋白组

一、核心原理：PEA 技术（一句话讲透）

1.      抗体对 + DNA 标签：每个目标蛋白对应一对抗体，分别偶联互补的单链 DNA（各带蛋白特异条形码）。

2.      双识别 + 邻位杂交：只有两个抗体同时结合同一蛋白，两条 DNA 才会靠近、杂交成双链。

3.      延伸 + 扩增 + 定量：DNA 聚合酶延伸→PCR 扩增→qPCR/NGS 读数；信号强度 = 蛋白浓度。

关键优势：非特异性结合不会让 DNA 靠近，几乎无背景，特异性可达 99.7%。

二、技术特点（为什么选 Olink？）

超微量：1–6 μL血清 / 血浆即可（比传统 ELISA 少 100 倍）。

超高灵敏：检测下限 fg/mL 级，能抓到极低丰度的细胞因子、信号蛋白Olink。

超宽动态：10 个数量级，同时覆盖高丰度（白蛋白）与低丰度（炎症因子）Olink。

高通量：一次可测 96–384 样本；蛋白数：Target（48/96）、Explore（384）、Reveal（~1000）。

高重现：CV <10%（板内）、<20%（板间），适合大队列（上万例）。

样本类型：血清、血浆、脑脊液、尿液、细胞上清、组织裂解液。

三、主流产品 Panel（怎么选？）

Target 96/48：qPCR 检测，48/96 蛋白，验证阶段、小队列、低预算。

Explore 384：NGS 检测，384 蛋白，覆盖炎症、免疫、肿瘤、代谢，最常用。

Reveal（新品，2026）：NGS，~1000 蛋白，全面炎症 / 免疫 + 疾病相关 + cis-pQTL 蛋白，发现级Olink。

Explore HT：超高通量，384 蛋白 ×384 样本，超大队列（如 UK Biobank）。

四、实验流程（5 步出结果）

1.      样本准备：血清 / 血浆，1 μL 足够。

2.      PEA 反应：加抗体对→孵育结合→DNA 杂交延伸。

3.      PCR 扩增：生成带条形码的扩增子。

4.      NGS/qPCR 检测：测序或荧光定量，得到每个蛋白的读数。

5.      数据分析：标准化→差异蛋白→通路富集→ biomarker 筛选。

五、Olink vs 质谱（LC-MS）vs 传统 ELISA

Olink：靶向、超高灵敏、超微量、高通量、低 CV；适合血液 / 体液、大队列、低丰度蛋白。

LC-MS：无偏、全蛋白组、可发现新蛋白；但灵敏度低、CV 高、需大量样本；适合组织 / 细胞、发现阶段。

ELISA：单指标、低通量、高成本；适合少数指标验证。

一句话：Olink 是血液蛋白组的 “黄金标准”，质谱是组织蛋白组的 “金标准”，二者互补。

六、应用场景（最适合做什么？）

疾病 Biomarker 筛选：肿瘤早筛、自身免疫病、神经退行性疾病（如阿尔茨海默病）、心血管病；AUC 可达 0.9+。

大队列流行病学：UK Biobank、中国慢性病队列，上万样本的蛋白组扫描Olink。

药物研发：靶点验证、药效监测、耐药机制、pQTL 研究（蛋白数量性状位点）Olink。

多组学整合：Olink（蛋白）+ 基因组 + 转录组 + 代谢组，构建疾病分子网络。

免疫与炎症研究：细胞因子、趋化因子、免疫检查点蛋白的原位 / 循环水平分析Olink。