HRbio™ High Fidelity DNA Polym

产品描述

      HRbio™ High Fidelity DNA Polymerase是一款高保真 DNA 聚合酶，具有5′-3’聚合酶活性和3′-5’外切酶活性，能够读取和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板，能够扩增富含GC或AT的模板，能扩增低至1个拷贝的基因组，不同种属来源DNA模板均能扩增超过12 kb的片段。 使用HRbio™ High Fidelity DNA Polymerase 进行扩增，复杂的模板的扩增速度也能够达到15~30 sec/kb；多种模板在变性、退火和延伸皆为1sec的条件下，均能特异扩增2 kb产物。使用Sanger测序的方法进行检测，该酶突变率比Taq DNA聚合酶低56倍。使用本产品扩增得到的PCR产物为平滑末端。

产品组分

产品应用

1.高保真 PCR

2.基因克隆

3.生成测序模板

4.高 GC 含量 PCR

5.长片段 PCR（超过12 kb）

6.突变

7.高通量 PCR

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子 DNA 为模板/引物， 74℃ ，30 min 内，摄入 10 nmol 脱氧核苷酸摄入为酸不溶物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

推荐PCR反应体系（冰盒上配制）

PCR扩增程序

1、常规PCR扩增程序

【注】

[1]. 体系中已含有终浓度为2 mM Mg²⁺，如有需要，可用试剂盒中提供的25 mM MgSO₄，以0.2~0.5 mM为间隔向上摸索Mg²⁺最佳使用浓度，Mg²⁺的终浓度一般不超过3mM。
[2]. 针对部分复杂模板，可以根据需要在0-20 µl的范围内调整 5× Enhancer。
[3]. 建议在0.5-2U/50 µl范围内使用本聚合酶。由于该酶具有3’-5’外切酶活性，在使用时应最后加入反应体系，并立即进行反应。如需进行TA克隆的加A步骤，必须对PCR产物进行纯化。
[4]. PCR反应在冰上配制后，直接置于预热至80℃的PCR仪上进行反应，可增强PCR反应的特异性，减少非特异性扩增。
[5]. 大部分的模板预变性时间1 min，每个循环变性时间10 sec即可，部分复杂模板可以适当提高预变性时间到3min，每个循环变性时间15 sec。
[6].根据该酶反应体系的特性，为了获得更好的特异性，退火温度应尽量高于引物Tm值，在+3℃范围内即可。退火时间过长可能导致扩增产物呈弥散状。因此，推荐退火时间设置为10 sec。对于一些困难模板，退火时间可在10-30 sec之间调整。

长片段PCR扩增程序

 本产品具有高特异性和长片段扩增能力，通常扩增超过12kb的片段，建议增加模板（基因组建议增加到100ng/50μL），降低循环中的变性温度，提高引物的Tm值（一般不超过68℃），延伸温度调整为68℃。如果有必要，以0.2-0.5mM为间隔向上摸索Mg²⁺最佳浓度。

高GC片段PCR扩增

使用常规的扩增程序即可扩增大部分的高GC含量片段，如果有需要，可以尝试在10-20μL的范围内调整5×Enhancer。

注意事项

本产品仅作科研用途！