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- 文献和实验
- 技术资料
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充足
NEB M2080 — 牛痘病毒加帽系统
产品名称
Vaccinia Capping System(牛痘病毒加帽系统)
别名:VCE加帽酶、酶法加帽系统
产品货号
M2080S(400 units)/ M2080L(2,000 units)
产品规格
- M2080S:400 units,浓度10,000 units/ml
- M2080L:2,000 units
- 包含组分:牛痘加帽酶、10X加帽缓冲液、GTP (10 mM)、SAM (32 mM)
- 储存温度:-20°C
- 保质期:24个月
核心优势
- 三酶活性合一:含有RNA三磷酸酶、鸟嘌呤转移酶和鸟嘌呤甲基转移酶三种活性,一次性完成Cap-0结构的完整添加
- 加帽效率近100%:所有帽结构均以正确方向添加,优于部分共转录加帽类似物的方向性
- 反应快速:37°C孵育30-60分钟即可完成加帽
- 高纯度:SDS-PAGE纯度≥95%,无核酸内切酶、外切酶、RNase活性
- 可搭配mRNA帽结构2'-O-甲基转移酶(NEB #M0366)在同一反应中一步生成Cap-1结构
- GMP级别产品可选
- 单次20 µl反应可加帽多达10 µg RNA(100 nt以上)
- 酶活定义:1单位指在37°C、1小时内将10 pmol (α³²P) GTP掺入80 nt转录本所需的酶量
同系列产品
- M2081 — Faustovirus加帽酶(FCE),新型加帽酶,活性更高,温度范围更宽,可一步法生成Cap-1
- M0366 — mRNA帽结构2'-O-甲基转移酶,配合M2080生成Cap-1结构
- E2080 — HiScribe® T7 mRNA合成试剂盒(含CleanCap® Reagent AG),共转录加帽方案
- M0463 — yDcpS脱帽酶,可将加帽RNA脱帽后再用M2080重新加帽
FAQ
Q: 该酶可以生成什么类型的帽结构?
A: 生成Cap-0结构(m7Gppp5'N)。如需生成Cap-1结构,需配合mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶(NEB #M0366)在同一反应中使用
Q: 加帽反应需要哪些主要组分?
A: 需要加帽酶、10X加帽缓冲液、GTP和SAM(S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体)
Q: 加帽反应前RNA需要如何处理?
A: RNA需在65°C加热5分钟变性,然后立即置于冰上5分钟,再进行加帽反应
Q: 该酶的来源是什么?
A: 来源于携带经改造的带His标签牛痘病毒加帽基因的大肠杆菌菌株,为重组表达产物
Q: M2080与FCE加帽酶(M2081)有何区别?
A: FCE是新一代加帽酶,具有更高加帽活性,温度适应范围更广,可低温或高温加帽,且可一步法生成Cap-1结构
Q: 加帽完成后是否必须纯化?
A: 视下游应用而定。某些应用可能需要纯化后再使用
Q: 加帽后可以继续加Poly(A)尾吗?
A: 可以,可使用NEB Poly(A)聚合酶(NEB #M0276)在加帽后进行加尾反应
应用场景
- 体外转录mRNA的5'端Cap-0结构添加
- mRNA疫苗与治疗性mRNA的酶法加帽生产
- 提高体外翻译、转染及显微注射用RNA的稳定性与翻译效率
- 使用标记GTP对含5'三磷酸RNA进行放射性或亲和标记
- 与2'-O-甲基转移酶联合使用生成Cap-1结构,降低体内免疫原性
- 大规模mRNA制备的酶促加帽工艺开发
华雅思创生物作为NEB品牌代理,为您提供M2080牛痘病毒加帽系统及全系列RNA加帽与体外转录产品。
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文献和实验0:00 牛痘病毒感染及病毒基因瞬时表达分析(第3部分)0 0:21 订阅内容21 0:45 Amino Allyl与染料耦合标记aRNA 45 2:30 纯化带标记的aRNA 150 6:02 结果362 6:33 结论393 本视频来源于网络,如有异议请联系我们,我们将在5个工作日内作出处理。
0:00 牛痘病毒感染及病毒基因瞬时表达分析(第1部分)0 0:29 内容简介29 1:06 感染前的设置66 2:33 感染细胞153 4:08 收集细胞248 5:38 TRIzol法提取RNA338 10:11 结果:Agilent BioAnalyzer分析数据611 10:43 结论643 本视频来源于网络,如有异议请联系我们,我们将在5个工作日内作出处理。
0:00 牛痘病毒感染及病毒基因瞬时表达分析(第2部分)0 0:09 内容简介9 0:21 订阅内容21 0:39 由RNA合成cDNA39 2:52 纯化双链cDNA172 5:55 体外转录355 6:31 IVT实验后aRNA的纯化391 9:41 结论581 本视频来源于网络,如有异议请联系我们,我们将在5个工作日内作出处理。
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