Lipofectamine 3000转染试剂

Lipofectamine™ 3000 转染试剂（货号：L3000015）— 先进脂肪纳米微粒技术驱动的下一代高效转染解决方案

一、产品概述

Lipofectamine™ 3000 转染试剂是由全球生命科学ling-dao-者赛默飞世尔科技（Thermo Fisher Scientific）旗下Invitrogen™品牌推出的新一代高效转染试剂，货号为L3000015，规格为1.5 mL。该产品采用先进的脂肪纳米微粒技术（Advanced Fat Nanoparticle Technology），专为解决传统转染试剂在难转染细胞系中效率低下的瓶颈而设计，广泛应用于质粒DNA转染、siRNA/shRNA基因沉默、miRNA调控研究、CRISPR/Cas9及TALEN基因编辑等前沿分子生物学实验领域。

作为Lipofectamine™系列的升级产品，Lipofectamine™ 3000在保持广谱适用性的基础上，显著提升了难转染细胞系的转染效率，同时降低了细胞毒性，已成为全球实验室进行基因功能研究、基因沉默和基因组编辑的标准化工具。

二、核心技术原理与产品优势

2.1 先进脂肪纳米微粒技术

Lipofectamine™ 3000采用创新的脂肪纳米微粒配方，结合专利P3000™增强剂协同作用，能够高效包裹核酸分子形成稳定的纳米级复合物。这些复合物具有优异的细胞膜穿透能力和内体逃逸效率，可将质粒DNA、siRNA、mRNA等遗传物质高效递送至细胞质和细胞核，实现目的基因的高水平表达或精准沉默。

2.2 五大核心优势

1. 性能卓越—超高转染效率：针对难转染细胞（如原代细胞、干细胞、神经元等）提供行业领先的转染效率，较Lipofectamine™ 2000提升显著。
2. 提高细胞活力—低毒性设计：对细胞作用温和，在实现高效转染的同时最大限度维持细胞存活率，适合长期培养和功能性研究。
3. 通用性强—多核酸类型兼容：一种试剂同时适用于DNA、RNA及共转染应用，无需更换不同试剂即可完成多样化实验。
4. 高性价比—用量更少、反应更多：1.5 mL规格产品足以完成多达1500次的转染反应（在24孔板中），显著降低实验成本。
5. 基因组编辑优化：专为CRISPR/Cas9和TALEN等新型基因组编辑应用优化，可最大化基因切割和重组效率。

三、主要应用领域

3.1 难转染细胞系的高效基因递送

Lipofectamine™ 3000专为攻克难转染细胞而设计，已成功应用于多种生物学相关性细胞类型：
- 成纤维细胞：3T3、COS-7
- 成肌细胞：C2C12、L6 CRL-1458
- 肝细胞：HepG2、HuH7
- 红白血病细胞：K562
- 乳腺癌细胞：MCF7、Hs578T
- 前列腺癌细胞：LNCap
- 肺癌细胞：A549、NCI-H460
- 骨肉瘤细胞：U-2 OS、Saos-2
- 结肠癌细胞：Caco2、SW480
- 胰腺癌细胞：PANC-1
- 皮肤黑色素瘤细胞：SK-MEL-28

3.2 基因表达与蛋白功能研究

Lipofectamine™ 3000可实现高效的质粒DNA瞬时转染，驱动重组蛋白在哺乳动物细胞中的高水平表达。研究人员可利用该试剂进行报告基因分析、蛋白定位研究、信号通路验证以及重组蛋白制备，为功能基因组学研究提供可靠的技术支撑。

3.3 RNA干扰与基因沉默

在siRNA介导的基因敲除实验中，Lipofectamine™ 3000展现出优异的核酸递送效率，能够实现高水平的靶基因沉默。该试剂同样适用于shRNA质粒、miRNA模拟物/抑制剂的转染，是RNAi功能筛选和机制研究的优选工具。

3.4 CRISPR/Cas9与TALEN基因组编辑

Lipofectamine™ 3000专为新型基因组编辑应用优化，通过高效转染增加利用TALEN或CRISPR成功切割和重组的可能性，最终最大化基因修饰效率并简化下游筛选过程。

3.5 高通量筛选与自动化平台

凭借快速简便的操作流程，Lipofectamine™ 3000极易适配自动化液体处理工作站和机器人转染系统，广泛应用于高通量RNAi筛选、化合物库筛选及大规模蛋白表达项目。

四、产品规格与使用参数

品牌：Invitrogen™（Thermo Fisher Scientific）
货号：L3000015
规格：1.5 mL（含Lipofectamine™ 3000试剂1.5 mL + P3000™增强剂1.5 mL）
产品类型：脂肪纳米微粒转染试剂
分类：无动物来源
适用细胞类型：已建立细胞系、干细胞、原代细胞、难转染细胞
适用核酸类型：质粒DNA、合成siRNA、shRNA质粒、miRNA、mRNA
兼容培养容器：6孔板、12孔板、24孔板、48孔板、96孔板、培养瓶
血清兼容性：是（含血清/无血清均可）
反应次数：24孔板可进行1000-1500次反应；6孔板可进行200-250次反应
储存条件：2–8°C冷藏保存，切勿冷冻
运输条件：室温或湿冰运输（稳定性已验证）

五、标准化实验操作流程

5.1 转染前准备

- 细胞状态：使用低传代细胞，确保转染前细胞健康且活细胞比例>90%
- 细胞密度：贴壁细胞转染时汇合度达到70-90%
- 培养基要求：转染时请勿添加抗生素，避免降低转染效率并导致细胞死亡
- 核酸质量：质粒DNA浓度建议0.5–5 μg/μL，使用去离子水或TE缓冲液配制

5.2 复合物制备（以24孔板为例）

Step 1：将DNA稀释于Opti-MEM™ I减血清培养基中，50 μL（含0.5 μg DNA）
Step 2：制备DNA与P3000™增强剂混合液，室温孵育
Step 3：将Lipofectamine™ 3000稀释于Opti-MEM™ I中，室温孵育5分钟
Step 4：将稀释后的DNA/P3000™混合液与Lipofectamine™ 3000试剂混合，轻轻混匀，室温孵育10-15分钟形成复合物
Step 5：将复合物直接加入含细胞的培养孔中，轻轻晃动混匀
Step 6：37°C、5% CO₂培养箱中继续培养，无需更换培养基；如需换液可在4-6小时后进行，24-48小时后检测

5.3 不同规格用量参考

96孔板：表面积0.3 cm²，铺板培养基100 μL，DNA用量0.1 μg，P3000™增强剂0.1 μL，Lipofectamine™ 3000用量0.1 μL和0.3 μL
24孔板：表面积2 cm²，铺板培养基500 μL，DNA用量0.5 μg，P3000™增强剂0.5 μL，Lipofectamine™ 3000用量0.75 μL和1.5 μL
6孔板：表面积10 cm²，铺板培养基2 mL，DNA用量2.5 μg，P3000™增强剂2.5 μL，Lipofectamine™ 3000用量3.75 μL和7.5 μL

六、常见问题解答（FAQ）

Q1：试剂不慎置于室温，是否还能继续使用？
A：可以。所有脂质体转染试剂均能够在室温下稳定保存数月，不会影响转染性能。

Q2：试剂不慎冻存，是否还能继续使用？
A：冷冻可能会改变脂质体的完整性与组成，试剂性能可能受到影响。建议在一周左右的时间内使用可能还可以，但使用新试剂比较有保障。

Q3：能否使用Lipofectamine RNAiMAX共转染siRNA和质粒DNA？
A：Lipofectamine 3000或Lipofectamine 2000可用于siRNA和质粒DNA的共转染实验，而Lipofectamine RNAiMAX并不适用。

Q4：能否使用Lipofectamine MessengerMAX转染试剂递送质粒DNA？
A：可以，Lipofectamine MessengerMAX转染试剂可用于同时递送质粒DNA和mRNA（在CRISPR技术中）；不过Lipofectamine 3000专为递送质粒DNA进行了条件优化，因此能够达到更好的转染效率。

七、文献引用与科研认可

Lipofectamine™ 3000转染试剂自上市以来被广泛应用于全球ding尖科研机构，相关研究成果发表于多个权威期刊，涵盖基因编辑、细胞生物学、肿瘤研究等多个领域。其可靠的实验表现和可重复性使其成为基因功能研究、药物靶点验证和细胞模型构建的标准化解决方案。

八、订购信息

货号L3000001，规格0.1 mL，适用场景：小规模预实验、条件优化
货号L3000008，规格0.75 mL，适用场景：常规实验室使用
货号L3000015，规格1.5 mL，适用场景：标准实验室规模（本页面产品）
货号L3000075，规格15 mL，适用场景：大规模筛选、平台化应用
货号L3000080，规格75 mL，适用场景：工业化应用、大规模生产

储存条件：2–8°C冷藏，避免冷冻。仅供科研使用，不可用于诊断程序。