兔膝关节软骨细胞

PriCells: 人软骨细胞的分化

试剂和材料： 1. 分化培养基：DMEM/F12（1：1）、1%ITS（胰岛素、转铁蛋白、硒；V/V）、TGF-β1 1ng/ml、HEPES 10mmol/L； 2. 胰蛋白酶/EDTA：胰蛋白酶（0.05%）和EDTA（0.53mmol/L）PBSA配制； 3. PBSA：无Ca2+,Mg2+的Dulbecco′s磷酸盐缓冲液； 4. 离心管，15ml； 5. 普通器皿，30ml，或圆锥底的离心管（50ml）； 实验方法： 1. 从培养瓶中吸出生长培养基弃之； 2. 

软骨细胞培养

软骨细胞的原代培养龄新西兰乳兔(雌雄不限，共18只，分6次处理),溺死，置于75％酒精溶液中10分钟，拿入超净工作台，自眼外眦至耳屏前剪开皮肤暴露皮下组织，再次严格消毒，自外眦外将颧弓由根部剪断，暴露髁状突，去净髁状突表面软组织及软骨膜，以眼科剪剪取髁状突表面的透明软骨，以磷酸缓冲液（PBS含青霉素、链霉素各100U/L）冲洗2遍，将软骨剪切成1－3mm3 左右碎块，0.25%胰蛋白酶先消化30-35分钟，PBS浸洗2遍；后置于50ml玻璃培养瓶，加0.1％Ⅱ型胶原酶(DMEM配制)，37消化

原代软骨细胞分离培养

以兔软骨细胞为例： ①一般根据实验要求，选取不同年龄组的兔子，实际上兔子的年龄越小越好，毕竟幼体组织的活力要高于成体组织的活力，耳静脉空气注射法处死后,无菌条件下分离后肢关节软骨和肋软骨，剥离包裹软骨组织的筋膜和软骨膜，放入盛有PBS液的培养皿中。 ②将分离得到的软骨组织剁碎成0.3-0.5mm的组织块，移入25cm2培养瓶，用含双抗的PBS液冲洗软骨3次。 ③加入软骨体积10-15倍的0.25%胰蛋白酶，37℃消化１－２小时后终止消化。 ④加入0.02%II型胶原