血液基因组DNA提取试剂盒

预期用途
用于核酸的提取、富集、纯化等步骤，其处理后的产物可用于临床体外检测使用。

检验原理
本产品使用超顺磁性微球可以特异性的吸附DNA，通过洗涤去除DNA以外的蛋白质等杂质。洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA，分离纯化得到高质量核酸。

储存条件及有效期
2-8℃下有效期为24个月（可在常温下短时间储存或运输）。

适用仪器
本试剂盒适用于BIO-DL 32, TIANGEN TGuide S32, TIANLONG NP968-C, Rosetta96等自动化核酸提取仪，也适用于手动提取。

样本要求
新鲜或冷冻的抗凝处理的人全血、组织、脱落细胞、拭子、血浆、血清、唾液、FFPE样本。

使用方法
首次使用前
在洗涤液 I 中缓慢加入指定量的异丙醇（分析纯，需客户自备），混匀后2~8℃保存。
在蛋白酶 K 干粉中加入指定量（见管身标签）的溶液A ，混匀后保存于 2~8℃，或分装后保存于-20℃。

一、手动操作流程

1. 客户自备物品：
异丙醇（分析纯）
80%乙醇
1.5 mL离心管：2个/样品
单通道移液器：20μL、200μL、1000μL
漩涡振荡器
垂直混合仪
恒温金属浴(Dry Bath Incubator, Cat.:2016C)或水浴锅(55℃)
磁性分离器

2. 操作步骤
1） 裂解
取一个新的1.5mL离心管，加入200μL的抗凝血液样品（不足200μL时可用PBS或洗脱液 补足），再分别加入10μL的蛋白酶K（检查是否已加入溶液 A ）和230μL的裂解液 ，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡10s后，置于55℃条件下反应5min。
2） 结合
加入320μL的异丙醇和20μL的磁珠悬液 ，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡10min(或漩涡震荡10s后置于垂直混合仪上反应10min)。然后将离心管置于磁性分离器上放置2min，用移液器移去上清液并取下离心管。

注意：此步骤的磁性分离时间应不少于2min。
3） 洗涤
（1）加入600μL 洗涤液I （检查是否已加入异丙醇），以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡至少1min，使磁珠充分重悬，再将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，移去上清液并取下离心管。重复该步骤一次。
（2）加入600μL 80%乙醇，以涡旋振荡器最大转速漩涡震荡至少1min，使磁珠充分重悬，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，移去上清液并取下离心管。重复该步骤一次。
注意：最后一步洗涤应尽量除尽洗涤液。
4） 干燥
保持离心管于磁性分离器上，于室温下静置10min后，即磁珠表面无明显光泽，取下离心管。
注意：干燥过程中若发现反应管中有液体残留时，可用小量程移液器吸弃液体。
5） 洗脱
加入100~200μL 洗脱液 ，涡旋震荡，或用移液器缓慢吹打磁珠，使磁珠充分重悬。然后于55℃条件下加热5min，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，转移上清液至新的1.5mL离心管中，此即为
纯化得到的基因组DNA，可保存于-20℃。

二、自动化操作流程

1. 客户自备物品：
磁棒式自动化核酸提取仪（BIO-DL 32, TIANGEN TGuide S32, TIANLONG NP968-C, BEAVER Rosetta32等）
8孔磁棒套2个
96孔深孔板1个
异丙醇（分析纯）
80%乙醇
1.5 mL离心管：2个/样品
单通道移液器：20μL、200μL、1000μL

2. 操作步骤
1）在 96 孔深孔板第 1 列和第 7 列依次加入 10μL 蛋白酶 K（检查是否已经加入溶液 A），200μL 样本，230 μL 裂解液和320 μL 异丙醇 。
注意：第1列和第7列试剂加入时按照以下顺序加入：先加入10μL 蛋白酶K，再加入200μL样本，然后加入230μL裂解液，最后加入320μL异丙醇。（若试剂加入顺序不对，会导致核酸提取浓度及纯度偏低。）
2）在第 2 列和第 8 列加入 600μL 洗涤液I（检查是否已加入异丙醇） 和20μL磁珠悬液。
3）在第 3 列和第 9 列加入 600μL 洗涤液I（检查是否已加入异丙醇）。
4）在第 4 列和第 10 列加入 600μL 80%乙醇。
5）在第 5 列和第 11 列加入 600μL 80%乙醇。
6）在第 6列和第 12 列加入 100~200μL洗脱液。

注意事项
1. 操作之前，请务必认真阅读本产品手册。
2. 血液样品的质量对产物DNA的纯化量有较大影响，应避免反复冻融血液样品。
3. 蛋白酶K干粉溶解后，可分装储存于-20℃，但应避免反复冻融。
4. 应避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。
5. 磁珠取用前应充分重悬均匀。
6. 磁珠干燥前，应使用移液器吸尽洗涤液。
7. 应避免磁珠过度干燥，否则会严重降低核酸洗脱效率。
8. 建议使用质量较好的离心管和移液器吸头，避免因粘附磁珠而造成损失。
9. 在96孔板中进行磁性分离操作时，磁珠吸附时间可适当延长。
10.使用前请检查各组分是否存在析出情况，如有析出，请将试剂瓶置于 60℃水浴加热溶解后使用。