ATCC 14028 沙门氏菌标准菌株

ATCC 14028沙门氏菌（Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium ATCC 14028） 是制药微生物质量控制中重要的标准革兰阴性杆菌参考菌株之一。它被USP和FDA法规明确指定用于非无菌药品特定微生物检查（Salmonella属缺席测试），直接保障非无菌产品中致病菌污染风险的控制及患者用药安全性。该菌株严格遵循“种子批系统”（seed-lot system）管理，传代次数不得超过5次，以维持遗传稳定性和测试结果的可追溯性。

一、在USP法规中的主要用处及法规引用

1. USP <62> Tests for Specified Microorganisms（特定微生物检查） 该菌株是沙门氏菌（Salmonella）特异性检查的指定阳性对照菌株，同时作为介质生长促进/抑制特性验证及指示特性验证的对照菌株。测试流程包括：预富集（Tryptic Soy Broth或Lactose Broth，30~35℃ 18~24小时）、选择性富集（Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth，30~35℃ 18~24小时）、分离培养（Xylose Lysine Deoxycholate Agar或Bismuth Sulfite Agar等，30~35℃ 18~48小时）。菌落特征为XLD琼脂上粉红色带黑色中心（H2S阳性）。产品符合要求时不得检出沙门氏菌。该菌株确保了选择性培养基的回收能力及指示反应的一致性，是非无菌药品（口服制剂、外用制剂等）微生物限度检查的核心环节。
2. 其他相关USP章节：
   • USP <61> Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests（生长促进测试的辅助对照，部分实验室用于方法适用性验证）。
   • USP <2021> Microbial Enumeration Tests（膳食补充剂补充）。 来源：U.S. Pharmacopeia General Chapters <62>（当前USP-NF版，明确列出“Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium such as ATCC 14028”或替代Abony株）。

二、在FDA法规中的用处及法规引用

FDA通过Pharmaceutical Microbiology Manual（ORA.007, Revision 02, 2020） 完全采纳USP方法，并明确将ATCC 14028指定为<62>沙门氏菌检查的标准测试菌株：

• 用于特定微生物检查的生长促进测试、方法适用性验证及指示特性验证，悬液可在2~8℃保存至验证期。 FDA在cGMP现场检查、ANDA/NDA申报中，要求必须使用药典指定菌株，否则方法视为不适合。

官方引用来源（建议查阅最 新版）：

• USP-NF 当前版：<62>（USP官网）。
• FDA Pharmaceutical Microbiology Manual（）。
• ATCC官网产品页（），明确标注USP <62>推荐菌株。

三、操作培养的难点（制药QC实验室实际经验总结）

ATCC 14028虽为BSL-2级菌株，但在日常QC操作中技术挑战较为突出，我实验室已建立严格SOP并持续再验证，难点如下：

1. 多步富集与选择性培养复杂：测试需依次经过非选择性预富集、选择性富集（RVS肉汤）和指示琼脂分离，任何一步污染或抑制均会导致假阴性。RVS肉汤对温度和pH极敏感，偏差易抑制目标菌生长。
2. 菌落形态与H2S产率变异：在XLD或HE琼脂上菌落呈粉红色带黑色中心，但H2S产率受培养条件影响可能出现不典型菌落（无黑心或黄色），增加鉴定难度。需严格控制孵育时间（18~48小时）和光源观察。
3. 高度运动性与温度敏感：菌株运动性强，易在琼脂表面形成泳动环，破坏菌落分离。孵育温度必须精确控制在30~35℃（±2.5℃），与ATCC通用37℃存在差异；微小温度偏差极易导致生长过慢或假阴性。与其他菌株需独立温箱管理。
4. 种子批管理和生物安全风险：必须采用种子批系统，主种子批-80℃或液氮冻存，工作种子批≤5次传代。作为肠道致病菌，操作全程需在BSL-2生物安全柜中严格PPE防护，防止实验室感染或交叉污染。悬液制备后2小时内使用或2~8℃保存≤24小时，否则活力下降。
5. 方法适用性验证复杂：产品中和剂/稀释剂必须验证对该菌株的回收率（≥50%），含抗菌成分的产品易导致假阴性；同时需确认选择性培养基对其他肠道菌的抑制能力。