PCR DNA分子量标准

DNA分子量标准问题分析

以λ/Hind III为代表的λDNA酶切片段用作电泳分析中的分子量标准，会发现电泳后分子量条带不对的问题。 解释原因如下：在Lambda DNA分子的左右臂存在着12个碱基组成的具有互补顺序的单链突出端-COS位点，COS位点的退火复性，在λDNA片段电泳分离时会出现问题，含左右臂片段在胶上应出现的地方条带会减弱或完全看不到，而复性的左右臂片段会结合成大的片段，即在较大的分子量区域内产生一个额外的条带，这就造成了不正常的带型。 解决以上问题的办法

DNA的分子量估算，别人给的。

酶活性；DNA聚合时的延伸速度为每分钟600个碱基；最佳温度65-75℃；dNTP的工作浓度为100-300μM，最佳Mg2+浓度为2-3mM，最佳pH为8.1-9.1；供应浓度为2.5-5U/μl；-20℃保存至少一年。九、Pfu DNA 聚合酶的使用方法：Pfu酶的使用方法基本同Taq酶。DNA扩增（PCR）时，50μl标准反应体系需2.5U左右。十、注意事项：(1) Pfu酶扩增效率通常比Taq酶差，这是由于Pfu酶具有3'→5'的外切酶活性（高保真性）所引起的，不是由于Pfu酶的质量不稳定所致

DNA 分子量计算

1. 无水的单个核苷酸分子量为： A= 313.21 T= 304.2 C= 289.18 G=329.21 2. 粗略估计，通常四个碱基的平均分子量，一个DNA 核苷酸（在盐溶液中）的平均质量为325道尔顿。 3. MW of a single-strand DNA molecule= （#of bp）× （325 daltons/per base）一个单链DNA分子的分子量=（# bp）×（325道尔顿/碱基） 4. 一个单链DNA分子摩尔