Collagenase NB 4 Standard Grad

产品描述

胶原酶（Collagenase，CAS NO. 9001-12-1）是一种蛋白水解酶，常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶，胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列（高频出现在胶原蛋白，很少在其他蛋白中发现）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。不同于其他蛋白酶，胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维，这种胶原纤维广泛存在结缔组织中。

胶原酶NB4标准级别（Collagenase NB 4 Standard Grade），来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种粗制的胶原酶，含有胶原溶解酶和其他酶活性包括梭菌蛋白酶和中性蛋白酶，这些酶比例的平衡确保温和和有效的组织消化。本品胶原酶活性≥0.10 U/mg（PZ），适用于人和动物组织各种细胞的分离，组织类型包括：脂肪组织、软骨、皮肤、胎盘、脐带组织和肺，还适用于细胞传代培养，比如胚胎干细胞。

保存与运输方法

保存：2-8℃干燥保存，至少1年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

一、储存液制备

胶原酶NB4标准级别溶于所有缓冲液（通常用于细胞分离）的浓度高达150mg/ml。酶溶液需连续放在冰上。由于胶原酶和一些二级蛋白酶依赖于Ca2+，因此建议在缓冲液内加入≥2mM Ca2+，且完全不能含钙离子螯合剂（比如EDTA）。

重溶的胶原酶NB4溶液需经0.22μm滤膜过滤除菌，按照单次用量分装，并置于-20℃冻存。如果避免反复冻融，可稳定保存1年。注意经0.22μm滤膜建议选择具低蛋白结合特性的膜（比如，醋酸纤维素，PVDF，或PES）。

二、工作液制备

用缓冲液稀释储存液到需要的胶原酶浓度，工作液需一直保存在冰上直到使用。

三、组织消化

对以下应用的建议起始浓度：脂肪组织（人或鼠类）—0.2-0.3 PZ U/ml；软骨（人或鼠类）—0.3-0.4 PZ U/ml；总的来说，具体胶原酶浓度取决于组织类型、来源和分离步骤。本胶原酶的最佳条件为37℃，pH 7.4。

四、失活和抑制剂

比如，通过降低反应温度或稀释酶溶液能够减低消化水平。

高pH能可逆失活胶原酶活性，低pH不可逆失活胶原酶活性。抑制剂包括半胱氨酸或螯合剂如EDTA。

注意事项

1. 本胶原酶NB4绝不可直接用在人身上。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。