Celthy Polyethylenimine Linear

产品简介

PEI 40000 是一种分子量为 40000 的高电荷阳离子聚合物，能够结合带负电荷的核酸分子，形成复合物， 并进入细胞中。PEI 40000 作为一种瞬时转染试剂，细胞毒性低，转染效率高。目前已经验证线性 PEI 转染试剂广泛适用于多种细胞系包括 HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 Hela 细胞等，转染效率高达 80%~90%。

PEI 40000 与 PEI 25000 转染试剂相比，优点主要体现在：

1. PEI 40000 较易溶解，可直接在水中溶解，而PEI 25000 需要先把水调成弱酸性助其溶解，溶解后再用 NaOH 把pH 调至中性；

2. PEI 40000 操作简便， 更易于使用，且比 PEI 25000 的转染效果好；

3. PEI 25000 含有 4-11%的丙酰基残留，其能阻止聚合物主链与 DNA 结合。相较于 PEI 25000，PEI 40000 是完全脱落的结构，因此其性能始终保持高效。

本产品为速溶型，溶解迅速，配制方便。

产品信息

储存条件

室温密封保存，有效期2年。储存液在 4 ºC 保存，有效期3个月。

注意事项

1.本品为盐酸盐形式的聚乙烯亚胺，具有易结块倾向。

2.对大多数细胞来而言，每1 μg DNA 使用3.0 μL PEI 40000转染试剂都能获得较高转染效率。

3.为了您的安全和健康，请穿好实验服并戴一次性手套，在通风橱中进行操作。

4.本产品仅用于科研。

使用说明

1. 储存液配置（1 mg/mL）

1) 材料

PEI 40000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或类似的生物级水、1 mol/L 氢氧化纳（NaOH）、一次性 0.1~0.2 μm PES 真空无菌过滤器、无菌 HDPE 或聚丙烯储存瓶。

2) 配置储存液（1 mg/mL）

a. 于1 L玻璃烧杯，将1 g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q®超纯水或其他相当级别的生物用水中， 在磁子搅拌器上搅拌均匀。

b. 待 PEI 40000完全溶解（通常不到5 min）。

c. 用氢氧化纳(1 mol/L)溶液调节 pH 为6.80~6.90。

d. 将溶液转入量筒内，并加水定容到1 L。

e. 用一次性0.1~0.2 µm PES真空过滤器过滤除菌，即得到1 mg/mL的储存液。

f. 根据需要分装并储存在4 °C，3个月稳定。

2. 贴壁细胞转染操作流程（以6孔板为例）

1) 接种细胞：为了提高转染效率，建议在转染前一天接种细胞，以转染时细胞密度在70%~80%为宜。

2) 按照以下体系配制DNA-PEI核酸-转染试剂复合物：

a. 对于每孔细胞，使用100 μL无血清培养基稀释2 μg目的DNA，充分混匀成 DNA 稀释液。

b. 立刻向 100 μL 的DNA 稀释液中加入 4 μL 的 PEI 40000 转染试剂，轻轻混匀。

c. 在室温下孵育10~15 min，使得形成 DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。

3) 转染细胞：

a. 在形成复合物过程中，移除细胞生长培养基，每孔中加入2 mL新鲜预热的完全培养基。

b. 直接将100 μL DNA-PEI核酸-PEI复合物加入细胞中，摇动培养板，轻轻混匀。

c. 37 ℃，5% CO₂培养箱培养，转染后最快5 h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。

不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

【注】该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。

3. 悬浮细胞转染操作流程（1L体系为例）

1) 接种细胞：根据细胞状态，选择合适的接种密度，建议细胞接种密度为 1-1.5×10⁶ cells/mL，使第二天转染时细胞密度为 2-3×10⁶ cells/mL 为宜。

2) 准备 DNA-转染试剂复合物：

a. 建议质粒（μg）与试剂（μL）参考配比区间为 1:0.5 - 1:3。

b. 质粒稀释：使用50 mL无血清培养基稀释2 mg质粒，并轻轻混匀。

c. 试剂稀释：使用50 mL无血清培养基稀释4 mL转染试剂，并轻轻混匀。

d. 配置复合物：将配置好的转染试剂稀释液加入到质粒稀释液中，轻轻涡旋混匀后，室温静置10-20 mins，备用。

3) 转染细胞：

a. 直接将配置好的 DNA-转染试剂复合物加入到1L细胞悬液中，摇动培养瓶，轻轻混匀。

b. 在 37℃，5% CO₂培养箱中培养24-72h后进行检测分析。