- ￥250 - 1200
- 经科
- JK5433
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- 2026年03月23日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
2× miRNA qPCR Fluore Green Master Mix
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100T/500T
| 规格： | 100T | 产品价格： | ￥250.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500T | 产品价格： | ￥1200.0 |
产品简介
2×miRNA qPCR Fluore Green Master Mix是专为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂，含有特殊的ROX Passive Reference Dye，适用于所有qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX浓度。DNA Polymerase采用化学修饰的热启动聚合酶，配合特殊的Buffer体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。
本产品必须与本公司的miRNA一链cDNA合成反转录试剂盒（加尾法，用于qPCR）(Cat#N132068)配套使用，以获得最终的实验结果。
储存条件
冰袋运输。-20℃避光保存，有效期1年。
注意事项
1. 使用前，将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
2. 实验时，请尽量使用无污染的耗材，避免污染。
3. 本产品避免反复冻融，配制时应避免强光照射。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5. 本产品仅用于科研。
使用说明
1. 体系配制
（1）将试剂放置室温下融化，使用前上下颠倒，轻轻混匀，并轻微离心后使用，避免起泡。
（2）将试剂置于冰上，按照下表配制试剂。RNase-free H2O可替换为其他用于分子生物学实验的无核酸酶水。
【注】：没有混匀试剂、使用振荡器混匀、未在冰上配置试剂等会导致反应性能下降。
1) 荧光定量PCR体系配制
|
组分 |
体积 (μL) |
体积 (μL) |
终浓度 |
|
2×miRNA qPCR Master Mix |
10 μL |
25 μL |
1 × |
|
Forward Primer（自备） |
X |
X |
400 nM |
|
Reverse Primer (10 μM) |
0.8 μL |
2 μL |
400 nM |
|
cDNA |
X |
X |
- |
|
RNase-free H2O |
Up to 20 μL |
Up to 50 μL |
- |
【注】：1) miRNA第一链cDNA的加入量不要超过qRT-PCR体积的1/10。高浓度cDNA易导致非特异扩增，可对cDNA适当稀释10-1000倍。2) Reverse Primer (10 μM) 来源于试剂盒N132068。由于专利的保密性，miRNA加A法反转录后，cDNA下游引物序列不同厂商之间存在差异，建议使用试剂盒N132068，以保证最终的实验结果。
2. PCR反应程序设置
可参考以下两个程序进行定量PCR反应。
a. 荧光定量PCR常规扩增程序（两步法）
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
10 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
35-40 |
|
退火/延伸 |
60℃ |
20 sec |
|
|
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
|
b. 荧光定量PCR快速扩增程序（两步法）
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
10 sec |
1 |
|
变性 |
95℃ |
5 sec |
40 |
|
退火/延伸 |
60℃ |
20 sec |
|
|
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
|
【注】：1）退火/延伸温度和时间可根据实验要求适当调整。2）常规程序与快速程序根据实验仪器选择，例如：ABI QuantStudio 5等仪器可以进行快速程序设置，Bio-Rad CFX96等仪器不可设置快速程序，需要进行常规程序设置。
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文献和实验DNA Polymerase采用化学修饰的热启动聚合酶，配合特殊的Buffer体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内进行准确定量。
液为预先优化好的混合物，通常包含缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、MgCl2及其他专利的添加剂。 一些专业人士坦言，对于多个指标，包括qPCR 效率、特异性、灵敏度、速度及耐受多个循环条件和样品类型，目前还尚未实现完美的平衡。大部分qPCR预混液能够在一些方面胜出，但很难是全部。如何选择最适合的那一个，小编下面给出了一些建议。 探针 还是染料? 当然，就多重分析而言，探针法是唯一选择。SYBR Green只适合单重反应。不过，SYBR Green的优势
真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI
等）、miRNA 加尾法逆转录试剂盒做反转录：适用于短片段 RNA（主要为 miRNA）的加尾法。 4）qPCR 检测 采用 Umibio 2×SYBR Green qPCR 试剂：预混 ROX1 型适用于 ABI 5700 等设备、预混 ROX2 型适用于 ABI 7500 等设备。 5）数据分析：采用仪器自带的 QPCR 分析软件进行数据分析 可以看到 qPCR 检测外泌体可行且可靠，但实验过程并不简单，因此我们对经常会遇到的问题及解答也进行了整理，帮助大家更好的完成实验。 qPCR检测外泌常见问题及解决
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用
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