次乌头原碱/63238-68-6

real-time PCR技术的原理及应用

分析.4、几个概念：（1）扩增曲线 ：（2） 荧光阈值：（3）Ct值：CT值的重现性：5、定量原理：理想的PCR反应： X=X0*2n非理想的PCR反应： X=X0 (1+Ex)nn：扩增反应的循环次数X：第n次循环后的产物量X0：初始模板量Ex：扩增效率5、标准曲线6、绝对定量1）确定未知样品的 C(t)值2）通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量二、实时荧光定量PCR的几种方法介绍 方法一：SYBR Green法 （一）工作原理 1、SYBR Green  能结合到双链DNA的小沟

Northern杂交

SSC ， 0.1%SDS 的塑料盒内，将盒盖好，置于水平振荡器上，温和振荡 10 min 。 5． 将膜转移至另一含有 100~200ml 预热至 68 ℃、含 0.1%SDS 的 0.5 × SSC 的塑料盒中。 68 ℃下温和振荡 10min 。 6． 重复步骤 5 ，再洗涤至少 2 次，使 68 ℃下共洗涤 3 次。 7． 在印迹纸上晾干膜，然后让膜于 -70 ℃下在含增感屏的暗盒内对 X 线片（ Kodar XAR-5 或相应的胶片）放射自显影 24

组织印迹的Northern杂交

中， 68 ℃杂交 20 小时。 4． 在 100ml 洗涤溶液Ⅱ中 42 ℃清洗尼龙膜 20 分钟，换上新鲜洗涤溶液，重复清洗 2 次。 5． 用 100ml 洗涤溶液Ⅲ在适当的温度下（ 60 ～ 68 ℃）。用手提式微型检测器监控尼龙膜上剩余的放射性。清洗完毕后，有义 RNA 探针杂交的膜不再有放射性信号，但用反义 RNA 探针杂交的尼龙膜一般具有可检测的放射性信号。该信号的强度依赖于目的 RNA 的丰度。室温下用 0.2 × SSC 对尼龙膜进行简单清洗，在空气中