粪便RNA试剂盒

产品简介
本试剂盒采用珠磨法与柱法纯化技术相结合，适合从不超过150mg粪便样品中快速提取高纯度总RNA。纯化柱优选高性能的超细玻璃纤维滤膜为材料，高效、专一吸附DNA或RNA。提取的总RNA纯度高，基本没有蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆 等多种下游实验。

提取流程
本产品采用特殊缓冲溶液加玻璃珠破碎样本，再过硅胶柱以高结合力的玻璃纤维滤膜为基质。滤膜在高浓度离子化剂(如盐酸胍或异硫氰酸胍)条件下，可通过氢键和静电等物理化学作用吸附核酸，而蛋白质和其它杂质则不被吸附而去除。吸附了核酸的滤膜经洗涤去除残留的蛋白质和盐，最后可以用低盐缓冲液或水，洗脱出滤膜上吸附的核酸。

产品优势

纯度高：独特的吸附剂更高效去除抑制因子
高浓度：能最大提取粪便样品中的总RNA
灵敏：可处理低至pg级的RNA
可靠：标配研磨珠可有效破碎粪便样本中的各种复杂成分

主要作用	从50-150mg粪便样品中提取微生物RNA
纯化产物	RNA
下游应用	RT-PCR、Northern Blot、Poly A纯化，核酸保护和体外翻译等
纯化方式	小量柱
纯化技术	玻璃纤维滤膜
操作方法	离心操作或抽滤操作
样品类型	粪便样品
样品用量	50-150mg
最少洗脱体积	30ul
操作时间	45分钟内
柱子每次载液体积	800ul
柱子最大核酸载量	70ug

• 问：基因组RNA 的得率较低或无基因组 RNA，如何解决？
  答：1.新鲜样本：如果试剂没有问题，外源性污染也可以排除的话，降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解样本的话，一定要使裂解液能覆盖住样本。
  1.粪便 DNA 产量主要来源样品内微生物、食物残渣含量，冰冻贮存过程中 DNA 会发生不同程度的降解导致 DNA 含量降低。建议尽量使用新鲜样品或贮存时间较短样品进行 DNA 提取。
  2.粪便样品主要是加入锆珠后进行涡旋裂解，涡旋后应是个均匀的状态，如果涡旋后明显是不均匀的或有成块的情况，可适当延长涡旋时间至其完全混匀。对于较大或较硬的样品，可在加入玻璃珠之前先将其碾压细碎。
  3.DNA 洗脱不适当：洗脱缓冲液pH 值过低会阻碍 RNA 从硅胶膜上洗脱下来，应确保洗脱液 pH值在7.0-8.5之间，洗脱液应该滴在纯化柱膜中央。加入洗脱液后在室温静置2-5分钟，可提高洗脱效率，加大 RNA产量。
• 问：RNA制备中低A260/A230比率对下游应用有何影响？
  答：下游应用的效率很大程度上取决于所用RNA样品的纯度。纯 RNA 的 A260/A230 比值应约为2或略高于2;然而，对于该比率的可接受下限尚未达成共识。在本试剂中，漂洗液以裂解缓冲液均含由高盐成分组成，硫氰酸胍会影响在230吸收峰值。