人KI-67抗原(Ki-67)ELISA试剂盒

商品属性：

检测原理：

通过特异性抗人Ki-67单克隆抗体包被于微孔板，与样本中的Ki-67结合形成固相抗体复合物。加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的检测抗体后，形成“捕获抗体-Ki-67-检测抗体”的三明治结构。经洗涤去除未结合物质，加入TMB底物显色，HRP催化TMB产生蓝色产物，在酸性终止液作用下变为黄色。颜色深浅与Ki-67含量成正比，酶标仪在485nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。

数据及参考曲线：

实验原理:

该方法采用双抗体夹心ELISA技术：

微孔板预先包被特异性抗人Ki-67单克隆抗体（捕获抗体）；

加入待测样本后，样本中的Ki-67与固相抗体结合；

随后加入生物素化或HRP标记的检测抗体，形成“捕获抗体–Ki-67–检测抗体”复合物；

洗涤后加入HRP标记的亲和素（若使用生物素-亲和素系统），再加入TMB底物显色；

HRP催化TMB生成蓝色产物，酸性终止液使其变为黄色；

在450 nm波长下测定吸光度（OD值），颜色深浅与Ki-67浓度呈正比，通过标准曲线计算浓度。

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实验步骤：
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一、试剂准备‌
所有试剂使用前平衡至室温（18–25℃）；
洗涤液按比例稀释（如10×稀释为1×）；
标准品用稀释液复溶并进行倍比稀释（如0、0.5、1、2、4、8 ng/mL）。
‌二、加样‌
设立标准孔、样本孔和空白孔（仅加稀释液）；
每孔加入50 μL标准品或待测样本；
可对血清/血浆样本进行1:2预稀释以减少基质干扰。
三、温育‌
封板后37℃温育60分钟，使抗原充分结合；
温育期间避免阳光直射。
四、洗涤‌
弃去孔内液体，每孔注入300–350 μL洗涤液；
静置30秒至1分钟，甩干，重复5次；
拍干微孔板，避免残留液滴影响后续反应。
‌五、加酶标抗体‌
每孔加入100 μL生物素化检测抗体；
37℃避光温育60分钟。
‌六、再次洗涤‌
同上法洗涤5次，确保彻底清除未结合抗体。
‌七、加HRP-亲和素‌
每孔加入100 μL HRP标记亲和素；
37℃避光温育30–60分钟。
八、第三次洗涤‌
再次洗涤5次，拍干。
‌九、显色‌
每孔加入显色剂A和B各50 μL（或TMB单组分90–100 μL）；
37℃避光显色15–30分钟，观察颜色变化。
‌十、终止反应‌
每孔加入50 μL终止液，轻轻震荡混匀；
溶液颜色由蓝变黄，立即进行测定。
‌二一、读数与分析‌
使用酶标仪在450 nm波长下测定OD值；
以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线；
将样本OD值代入方程，计算TPS浓度。