细菌裂解液（革兰氏阳性菌）

细菌基因组 DNA提取试剂盒操作指南 （DP302）——细菌

以下操作按照天根产品 DP302 细菌基因组 DNA 提取试剂盒的说明书进行，所有反应现象仅适用于该产品及本文所标明的样本量。如使用其它操作流程或产品，样本量不同可能现象与本文有所差异。 实验准备： 1. 培养菌液1-5ml （本实验以革兰氏阴性菌为例，革兰氏阳性菌前处理详见说明书） 2. 移液器及配套无菌枪头（200 μl ，1ml） 1.5 ml 离心管 3. 无水乙醇 4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机 实验准备-试剂盒准备 使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇，加入体积请

纯化 Strep-Tag 融合蛋白

A 为 Strep-Tactin®或 Strep-Tactin®XT 分别纯化 Twin-Strep-tag®-mCherry 荧光蛋白的结果。 从中可见，两者所纯化出的蛋白纯度都很高 (下方条带为目标蛋白的降解物，非杂质)，使用二代 Strep-Tactin®在清洗杂质的步骤会损失少量目标蛋白。若细菌裂解液中杂质比较多，需要多次清洗，则更适用三代。   另外，我们也针对几种不同蛋白的纯化表现进行了比较 ，平均而言，三代抓取目标蛋白的效果约为二代的 1.5 倍。   因此，整体来看，两款填料都能纯化出高纯

　细菌的结构

-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞酸两种氨基糖经β-1.4糖苷键连接间隔排列形成的多糖支架。在N-乙酰胞壁酸分子上连接四肽侧链，肽链之间再由肽桥或肽链联系起来，组成一个机械性很强的网状结构。各种细菌细胞壁的肽聚糖支架均相同，在四肽侧链的组成及其连接方式随菌种而异。 　 革兰氏阳性菌例如葡萄球的四肽侧链氨基酸由D-丙-D-谷-r-L-赖-D-丙组成。初合成的肽链末端多一个D-丙氨酸残基。肽桥是一条5个甘氨酸的肽链，交联时一端与侧链第三位上赖氨酸连接，另一端在转肽酶的作用下，使另一