Desmin荧光染色试剂盒（结蛋白）

核蛋白染色时保留细胞质，报告蛋白荧光的改进方法

Rosa26-EYFP（CD4/EYFP）小鼠脾细胞中观察到，未经处理的活细胞EYFP荧光信号最强；然而，使用FoxP3染色试剂盒（含Fix/Perm和Perm两步法）后，EYFP荧光几乎完全消失。值得注意的是，若在标准染色流程前先用2%多聚甲醛（PFA）进行预固定，则EYFP信号可有效保留。 这一现象表明，荧光丢失并非源于荧光蛋白的化学降解，而是由于Fix/Perm缓冲液固定能力不足，导致可溶性胞质EYFP在后续破膜和洗涤步骤中被被动洗脱出细胞。   怎样解决

免疫组化中抗体选择要求

物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应；而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。这主要与后面有无三抗和三抗种类有关。（3）选择IgM还是IgG。一般一抗是IgM，那么二抗就选择IgM；反之，一抗是IgG，则二抗选择IgG。（4）生产厂家。一般SP三步法我们实验室选择中杉金桥的二抗染色试剂盒，内含有工作液的二抗，故试验中只需摸索一抗的浓度即可，效果还可以；而免疫荧光的二抗我一般选择Jackson ImmnoResearch公司

免疫组化技术——典型实验案例学习

案例一：DAB染色后切片着色一片黄/背景深背景：奥运会期间我们课题组研究生都在实验室做实验，许多从北京购买的试剂买不到，对我们的许多实验产生了很大的影响。我以前一直用中杉金桥的Sp三步法染色试剂盒，效果不错，在奥运会期间我准备做同批实验分不同批次酶免疫组化实验，第一批组化实验结果很好，抗体浓度感觉比较合适（Santa Cruz公司1：200），等做第二批时发现封闭血清不够了，为了保证实验顺利进行，我又从福州迈新顶了一个SP试剂盒，同时抗体稀释液也不够了，我又重新从博士德公司买了一小瓶10