trans-2-(3-fluorophenyl)cyclop

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

最近，随着基因编辑技术不断曝光，这项技术也越来越火，越来越受到关注，但大部分媒体都只是浅尝辄止进行宣传而已，实质性的怎么操作，具体的步骤却很少涉及。鉴于此，师兄就把张峰的手稿扒拉出来，分享给大家。同时也欢迎大家与我探讨，我的微信号;shixiongcoming，向我申请的时候注意，写上你的理由哦，最近加我的人太多，不注明来由的读者，别怪师兄拒绝你呦。   Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System Le Cong

CRISPR-Cas9 全程实操教程：从 gRNA 设计到挑单克隆全程指导

基本原理CRISPR-Cas9 是一种细菌获得性免疫，用于降解入侵的外源 DNA。CRISPR RNA (crRNA) 与转录激活 crRNA (Trans-activating crRNA， tracrRNA) 退火形成的复合物能特异性识别与其互补的基因组序列，引导 Cas9 核酸内切酶在目的片段生成 DNA 双链断裂，如下图所示。通过基因工程手段对 crRNA 和 tracrRNA 进行改造，将其连接在一起得到 sgRNA (single guide RNA)。通过将表达 sgRNA

基因组编辑技术应用于作物遗传改良的进展（上篇）

。CRISPR/Cas9 属于 II 类，仅需要成熟的 crRNA(CRISPR-derivedRNA)、tracrRNA(trans-activatingRNA) 和 Cas9 蛋白就能实现对外源 DNA 的切割。经人工改造的 CRISPR/Cas9 系统主要由引导 RNA(singleguideRNA，sgRNA) 和 Cas9 蛋白结构域组成。其中，sgRNA 起精确定位作用，其 5′端前 20 个核苷酸碱基决定 Cas9 蛋白特异性切割基因组 DNA 的部位;Cas9 蛋白包含类 HNH 核酸