2020年中国药典禽源性病毒-禽白血病病毒纯化及RT-PCR

新型冠状病毒检测方法之荧光定量 RT-PCR

新型冠状病毒背景介绍与核酸检测整体解决方案分享，从核酸模板制备到 RT 实验策略，再到 qPCR 实验解析与应用。

「谁」动了我的扩增曲线？

了我的扩增曲线呢？ 其实，这种现象并不是偶发的，有很多原因可能导致，并且有个专属名称「Hook Effect」，翻译过来叫「鱼钩效应」。「鱼钩效应」指在荧光定量 PCR 过程中，DNA 扩增到指数增长期后出现的一种荧光信号不能保持稳定（或者上升）而出现下降的现象 [1]。 导致扩增曲线出现这一现象的因素比较复杂，这里我们分别从嵌入性染料法与探针法两种定量方式的角度为大家解释： 嵌入性染料法： 嵌入性染料法（例如 SYBR Green I）产生「鱼钩效应」主要是由于模板序列混杂，在 PCR

做 real-time PCR之前，你应该如何着手设计引物？做哪些准备？看完必会！

过，你要先确定你选择哪个方法。如果你想用 Taqman Probe 法，请你选择 primer express 3.0。如果你想用 SYBR 法，我建议你选 primer premier 5.0。 为什么？请往下看。 3）两种引物设计软件之比较。 先说专门为 real-time PCR 定制的 primer express 3.0 。这个软件其实是为 Taqman 探针法设计的，而不适合SYBR染料法。 如果你用探针法，强烈推荐。打开软件就会发现，在方法选择的下拉菜单中