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文献和实验qPCR引物设计，Primer3 Plus 和 Primerbank 都能搞定！
引物设计是 qPCR 非常重要的环节。今天小编给大家推荐 2 款简单实用的在线 qPCR 引物设计网站，让你分分钟搞定 qPCR 引物！Primer3 Plus严格的 qPCR 引物设计一般要求其中一条引物要跨外显子，最好在 3' 端设计引物，产物的长度在 300bp 以内等。本在线软件可满足 qPCR 引物设计的要求。网址链接：http://www.primer3plus.com/1、选择 Run latest Versionof Primer3Plus，就进入了设计引物的主页面，合理的使用
找的基因后，在几对引物中选择自己看着顺眼的那对拿去合成就好了。开玩笑啦，还是有选择标准的：首先看看 Amplicon Size，也就是扩增长度，建议在 100~300bp 间比较好扩增；引物长度在 20~25bp 较好，而且上下游引物间不要相差超过 5bp；再就是看看 Tm 值，60℃左右，相差不要超过 1℃。综上，将选择好的引物（这里我选择 Primer Pair 3），进一步验证，这里很友好，支持复制粘贴。5. 还是回到 Pubmed，打开里面的 primerblast。网址是：https
PCR引物设计和优化(PCR PRIMER DESIGN AND REACTION OPTIMISATION)
for calculation of the Tm isTm = 4（G + C） + 2（A + T）℃.Thus, the annealing temperature chosen for a PCR depends directly on length and composition of the primer（s）。 One should aim at using an annealing temperature （Ta） about 5℃ below the lowest Tm of ther pair
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