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文献和实验qPCR引物设计,Primer3 Plus 和 Primerbank 都能搞定!
引物设计是 qPCR 非常重要的环节。今天小编给大家推荐 2 款简单实用的在线 qPCR 引物设计网站,让你分分钟搞定 qPCR 引物!Primer3 Plus严格的 qPCR 引物设计一般要求其中一条引物要跨外显子,最好在 3' 端设计引物,产物的长度在 300bp 以内等。本在线软件可满足 qPCR 引物设计的要求。网址链接:http://www.primer3plus.com/1、选择 Run latest Versionof Primer3Plus,就进入了设计引物的主页面,合理的使用
gDNA 的影响,但这种引物设计耗时耗力,并且对于没有内含子的基因,这种方法可能就行不通了。 这时,通过 DNase 对提取的 RNA 进行预处理成为简单并且唯一的方法。诺唯赞的三代逆转录酶系列产品(R312/R323)含有 gDNA 清除模块,2 min 就能有效的清除基因组 DNA 的污染。 3. 选取合适的 RT Primer 是关键 通常 RT primer 可分为三类:oligo dT,随机引物以及基因特异性引物。根据不同的实验需求需要选择适合的引物进行使用。oligo dT
找的基因后,在几对引物中选择自己看着顺眼的那对拿去合成就好了。开玩笑啦,还是有选择标准的:首先看看 Amplicon Size,也就是扩增长度,建议在 100~300bp 间比较好扩增;引物长度在 20~25bp 较好,而且上下游引物间不要相差超过 5bp;再就是看看 Tm 值,60℃左右,相差不要超过 1℃。综上,将选择好的引物(这里我选择 Primer Pair 3),进一步验证,这里很友好,支持复制粘贴。5. 还是回到 Pubmed,打开里面的 primerblast。网址是:https
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![[Phe4]-Dermorphin (1-4) amide [Tyr-D-Ala-Phe-Phe-NH2; MW 545.64]](https://img1.dxycdn.com/p/s14/2026/0219/069/2175388723449644202.jpg!wh200)


