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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
69
- 英文名:
Solid-Lipase,S-LPS
- CAS号:
/
- 保质期:
1年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
100管/96样
微量法100/96S
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
LPS又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。LPS广泛的存在于各种生物中。
测定原理:
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算LPS活性。
自备仪器和用品:
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、甲苯80mL、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体65mL×2瓶,4℃保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡20min。
试剂三:甲苯80mL×1瓶,4℃保存(自备)。
试剂四:液体10mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体10 μL×1瓶,10 µmol/mL的标准溶液,4℃保存。临用前加入3.168 mL甲苯,充分溶解。
样本处理:
建议称取约0.1g土样,加入1mL试剂一进行冰浴匀浆,再用回旋式振荡器振荡提取15min,4℃,4000g离心10min,取上清待测。
S-LPS测定操作:
- 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到710 nm,蒸馏水调零。
- 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min。
- 在1.5mL EP管中依次加入下列试剂
| 试剂名称(μL) | 空白管 | 测定管 |
| 蒸馏水 | 150 | |
| 样本 | 50 | |
| 试剂一 | 300 | 300 |
| 试剂二 | 100 |
| 试剂三 | 800 | 800 |
| 试剂名称(μL) | 空白管 | 测定管 | 标准管 |
| 上清液 | 400 | 400 | |
| 标准品 | 400 | ||
| 试剂四 | 100 | 100 | 100 |
注意:空白管和标准管只需测定一次。
S-LPS活性计算公式:
活性单位定义:37℃中每克土样每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
S-LPS (μmol/min/g 土样) = [C标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T
=16×[(A测定管-A空白管)÷(A标准管- A空白管)]÷W
C标准品:10 µmol/mL;V反总:反应总体积,0.8mL;V样:反应中加入样本体积,0.05mL;V样总:加入提取液体积,1mL; W:样本质量,g;T:催化反应时间,10 min。
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