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文献和实验,最长使用时间一般不宜超过3天。标记好的探针可以保存在 -20℃。3. EMSA 胶的配制:(1) 准备好倒胶的模具。可以使用常规的灌制蛋白电泳胶的模具,或其它适当的模具。最好选择可以灌制较薄胶的模具,以便于干胶等后续操作。为得到更好的结果,可以选择可灌制较大 EMSA 胶的模具。(2) 按照如下配方配制20毫升4%的聚丙烯酰胺凝胶(注意:使用29:1等不同比例的Acr/Bis对结果影响不大)。TBE buffer (10X) 1毫升重蒸水 16.2毫升39:1 acrylamide
bp ssDNA) ddH2O 至50ul 反应条件 Cycle=30 Denaturation Annealing Polymerixation 1st 94 2min V 30s 72 1min Subsequent 94 30s V 30s 72 1min Last 94 30s V 30s 72 5min 其中退火温度从39.2到47.0分为8个梯度。 图象中1-7反应条件如上述,8中没有加template,O4点的是200ng的59bp ssDNA,O44点的是50
(十二烷基硫酸钠)50 mM Tris-HCl pH 8.0蛋白酶抑制剂Tris-HCl 缓冲液20 mM Tris-HCl pH 7.5蛋白酶抑制剂●电泳、转膜、封闭缓冲液Laemmli 2× 缓冲液/上样缓冲液4% SDS10% 2-巯基乙醇20% 甘油0.004% 溴酚蓝0.125 M Tris-HCl测定 pH 并调节至 pH 6.8。电泳缓冲液(Tris-甘氨酸/SDS)25 mM Tris 碱190 mM 甘氨酸0.1% SDS测定 pH,pH 应为约 8.3。必要时进行调节。转膜
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