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文献和实验： （1）引物的长度一般为15-30 bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于 Taq DNA 聚合酶进行反应。 （2）引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错配。引物3’端出现3 个以上的连续碱基，如GGG 或CCC，也会使错误引发机率增加。 （3）引物3’端的末位碱基对Taq 酶的DNA 合成效率有较大的影响。不同的末位碱基在错配位置导致不同的扩增
-TOF）得到相应的肽质指纹图谱，然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质。结果 获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱，三块胶的平均蛋白质匹配率达76%，蛋白质点在位置上有较好的重复性，不同胶间的蛋白质点在等电聚焦IEF方向偏差是（0.98±0.26）mm，SDS-PAGE方向偏差是（1.23±0.22）mm，并且得到了若干与细胞增生、分化、周期调控信号转导或肿瘤发生有关的蛋白质，例如SFN，热休克蛋白-27等。结论 为进一步探讨癌变机理及筛选其特异性分子标志物打下方法学基础。 《双向电泳技在筛选
Slice and Explant Culture Protocols Hevner lab 2002
1.98 g/l (11 mM) NaHCO3 2.1 g/l (25 mM) dilute to 1000 ml Sterile filtered Krebs buffer (use same day as prepared) 1X Krebs buffer 98 ml HEPES 1M 1 ml Pen/strep 100X 1 ml gentamicin 200 l Sterile filter at pore size
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