BYabscience 人RNA聚合酶转录终止因子Ⅰ(TTF

体外转录实用技巧

。） 使用不同的聚合酶 通常用于体外转录的三种 RNA 聚合酶可以相互不同地转录给定的模板。当转录不能完成时，可以充分利用这种转录给定模板序列的不同能力。改变转录模板前面的聚合酶启动子序列是一种劳动密集型修复，因为它可能需要设计 PCR 引物或亚克隆。Ambion 具有可简化过程的载体和引物。pTRIPLEscript 系列载体具有串联排列的 SP6、T7 和 T3 启动子，这些载体特别适用于亚克隆转录模板。或者，Ambion 的无克隆启动子添加试剂盒 Lig'nScribe 可用于改变可 PCR 扩增

这几类 PCR 技术你知道吗？

产物的 DNA:RNA 杂交链变性后利用大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ Klenow 片段或反转录酶合成 cDNA 第二链，最后用对单链特异性的 S1 核酸酶消化该环，即可进一步克隆。但自身引导合成法较难控制反应，而且用 S1 核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于 mRNA 5' 端序列出现缺失和重排，因而该方法目前很少使用。 2、置换合成法： 该方法利用第一链在反转录酶作用下产生的 cDNA:mRNA 杂交链不用碱变性，而是在 dNTP 存在下，利用 RNA 酶H在杂交链的 mRNA 链上造成切口

常规PCR技术及几类PCR新技术的介绍

退火，并由DNA聚合酶催化引物延伸生成双链靶DNA， 最后扩增靶DNA。cDNA第二链的合成方法有以下几种: 1、自身引导法 合成的单链cDNA 3'端能够形成一短的发夹结构，这就为第二链的合成提供了现成的引物，当第一链合成反应产物的DNA:RNA杂交链变性后利用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段或反转录酶合成cDNA第二链，最后用对单链特异性的S1核酸酶消化该环，即可进一步克隆。但自身引导合成法较难控制反应，而且用S1核酸酶切割发夹结构时无一例外地将导致对应于mRNA 5'端序列出现缺失和重排