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文献和实验(1)SILVER SEQUENCETM DNA 测序试剂盒。 (2)丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺储备液(38%丙烯酰胺 W/V,2%甲叉双丙烯酰胺 W/V):95g丙烯酰胺,5g甲叉双丙烯酰胺溶于140ml 双蒸水中,定容至250ml,0.45mm过滤器过滤后,贮于棕色瓶中,置于4℃冰箱可保存2周。 (3)10%过硫酸铵,0.5g过硫酸铵溶于4ml水中,定容至5ml,应新配新用。 (4)10×TBE缓冲液(1 mol/L Tris,0.83mol/L 硼酸,10mmol/L EDTA): 121.1g
高度二级结构化的区域。二、材料 待测已提纯的DNA ,可为单链,也可为双链。三、设备 高压电泳仪,测序用电泳槽,制胶设备,PCR仪。四、试剂(1)SILVER SEQUENCETM DNA 测序试剂盒。(2)丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺储备液(38%丙烯酰胺 W/V,2%甲叉双丙烯酰胺 W/V):95g丙烯酰胺,5g甲叉双丙烯酰胺溶于140ml 双蒸水中,定容至250ml,0.45mm过滤器过滤后,贮于棕色瓶中,置于4℃冰箱可保存2周。(3)10%过硫酸铵,0.5g过硫酸铵溶于4ml水中,定容至5ml,应
离心5分钟, 多次重复此步骤。 (10)将上层水相转入新的eppendorf管, 加0.5倍体积的7.5 mol/L 醋酸铵, 2倍体积乙醇, 混匀后-20℃放置 30分钟。 (11)12000g离心15分钟, 去除上清液, 用70%乙醇小心清洗沉淀, 如果沉淀已被搅起, 重新离心, 倾去酒精, 真空干燥沉淀物。 (12)将DNA的沉淀物溶解于20ml去离子水中,取2ml样品进行琼脂糖凝胶电泳定量, 如果DNA量充足, 则可进行退火测序。
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