笃玛 鸡转录激活因子-1(ATF-1) ELISA 试剂盒

鸡转录激活因子-1(ATF-1) ELISA 试剂盒
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
500ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
250ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
125ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
62.5ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
31.25ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  
4. 配液：将30倍（48T的20倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

鸡转录激活因子-1(ATF-1) ELISA 试剂盒
计算
  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

鸡转录激活因子-1(ATF-1) ELISA 试剂盒
酶联免疫试验步骤
     将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
     编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
     加样反应：加标准品或样本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。
      洗    涤：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用工作洗涤液250μl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
      显    色：每孔加入底物液A 50μl，再加底物液B 50μl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。
      终    止：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡混匀，终止反应。
      测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。