热启动抗体修饰突变体Taq酶

荧光定量 FAQ 专题—前期准备

非特异性扩增的概率降到最低，想出了这种只有在高温下经过一定的时间才能激活并释放活性的酶—热启动酶。 热启动酶多用两种修饰方式：化学修饰和抗体修饰。 例如： Vazyme 的 ChamQTM QPCR Master Mix 中的 Champagne TaqTM DNA Polymerase 是经过抗体修饰的 Taq DNA Polymerase，95 ℃ 加热 30 sec 就可以灭活抗体激发酶活。AceQ® QPCR Master Mix 中 AceTaq®DNA Polymerase 是经过化学

荧光定量 FAQ 专题：前期准备

哦~模板的上样量若直接使用 cDNA 原液作为模板，建议使用体积不超过 qPCR 反应总体积的 1/10！当复孔之间重复性不佳时，可将模板做适当稀释后以大体积加入反应体系，可有效提高实验重复性。看小 V 做的实验，是不是重复性爆表啊~~~预变性时间常见的 qPCR 试剂预变性时间从 30 sec - 15 min 不等。科学家们为了封闭常温下酶的活性，使 qPCR 产生非特异性扩增的概率降到最低，想出了这种只有在高温下经过一定的时间才能激活并释放活性的酶—热启动酶。热启动酶多用两种修饰方式：化学

【转帖】怎样选出最合适的Taq酶

最基本的要求，影响PCR特异性的因素很多，包括模板、引物性质及质量、反应条件的控制等等，而高特异性Taq酶的出现大大减少了摸条件这一繁琐的实验过程，也为PCR产物快速有效的纯化（PCR产物直接纯化）打下了基础。这类酶最典型的代表是热启动Taq酶。大家都知道，在PCR第一个循环变性之前，有一个升温的过程，引物和模板会有一些非特异性配对，如果这时Taq酶发挥活性，就很容易产生非特异性扩增，由于循环初期模板量非常少，产生的非特异性条带经过后面的指数扩增，就会严重干扰目的片段的扩增，甚至导致特异性条带不能