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文献和实验液QF在65℃条件下预热。其他缓冲液在常温下保存。1、接种的固体培养基从37℃培养箱中取出,用包装膜封好后置于4℃条件下贮存。取液体振荡培养的Falcon试管到超净工作台中,在微量离心管中分装300 µl的E.coli 和300 µl 30%glycerol的LB培养基,用移液器上下吹吸混匀,置于-80℃贮存。2、将Falcon试管在室温条件下2700 rpm离心20 min。丢弃上清,将沉淀置于冰上。3、在0.6 ml缓冲液P1中重悬细菌沉沉小球。边吹吸边搅动,混匀而不要出块菌块,然后全部转移
的200 µl Sol I (P1)溶液。 三、对培养一昼夜的的Falcon试管在3600 rpm速度下进行离心12 min,丢弃上清。 四、用200 µl 5 M NaCl重悬农杆菌细胞,利用涡旋将农杆菌细胞混匀。转移到eppendorf 管中。 五、加入20 µl 10% N-Lauroylsarcosine sodium溶液,上下倒置6-8次混匀(从不同方向倒置)。 六、最大速度(13000 × g )下离心2 min,丢掉上清液。
一、实验材料NCI-H1299,购自上海晶莱生物技术有限公司。表 2.1.1 主要试剂试剂与耗材厂家(货号)细胞培养瓶FALCON 中国(353014)Penicillin/streptomycin solution(KGY002)0.25% Tripsin-EDTA(BK-E3076)PBS(BK330-2)胎牛血清GIBCO 美国(10270-106)1640 培养基Hyclone 美国(SH3080901)Annexin V-FITC/PI 凋亡试剂盒 二、实验仪器表 2.2.1 主要
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