离心管取出工具

人外周血PBMC的制备及注意事项

人外周血PBMC的制备流程 收集抗凝人外周血，用 1640 无血清培养基或 PBS 按照 1:1 的比例稀释，上下颠倒混匀或者用移液枪吹打混匀。 在 15 mL 离心管中，先加入 3 mL 充分混匀的 Ficoll 液（1.077 g/mL），再沿着管壁缓慢加入2 mL稀释后的血液，血液和 Ficoll 液分层明显为成功。 注：Ficoll 提前半小时从 4℃ 冰箱取出恢复到室温，温度过高会导致分离不明显，温度过低会导致密度过大，同样分离效果不好， 20~25℃ 最佳。。 将样本小心转移

移液工具如何选择？

a.根据需要处理样本容量的大小选择合适的量程，移液器最大量程的30%—100 % 是较佳的使用范；不要用小量程的移液器移取大体积的液体，以免影响准确度；同时，如果需要移取量程范围以外较大量的液体, 例如大于10ML以上的液体，建议使用瓶口分液器或大容量移液器工具, 如DispensMate瓶口分液器Levo Plus/Levo Me电动大容量。   b.根据样本的性质选择不同的移液工具，空气体活塞式移液器适用常规水性溶液； 而外置活塞式移液器适用于高蒸气压、高粘度、易挥发、易气泡的液体。  

蛋白质印迹（Western blot）实验方案

冰上，用冰冷的 PBS 洗涤细胞。2. 吸出 PBS，然后加入冰冷的裂解缓冲液（每 107 细胞/100 mm 培养皿/150 cm2 培养瓶加入 1 ml；每 5×106 细胞/60 mm 培养皿/75 cm2 培养瓶加入 0.5 ml）。3. 用预冷的塑料细胞刮棒刮下贴壁细胞，然后轻轻地将细胞悬浮液转移至预冷的微量离心管中。4. 在 4 ℃ 下持续搅拌 30 分钟。5. 在 4 ℃ 预冷的离心机中以 16000 × g 的转速离心 20 分钟。6. 轻轻地从离心机中取出离心管，置于冰上。将上清