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文献和实验。 9.弃收集管中的滤液,将柱子套回2ml收集管内收集管。室温下,13,000 x g离心2 min以甩干柱子基质残余的液体。 10.把柱子装在一个干凈的1.5ml离心管上,加入15~30μl(具体取决于预期的终产物浓度)的Elution Buffer(或TE缓冲液)到柱基质上,室温放置1min, 13,000xg离心1min以洗脱DNA。第一次洗脱可以洗出70-80%的结合DNA。 如果再洗脱一次的话,可以把残余的DNA洗脱
一次。 吸出混合物的液体部分。加入 800 μl 的 1 × SDS 胶加样缓冲液到球珠中,煮沸 4 min。 将样品加入到大孔的不连续 SDS-PAGE 梯度胶中,在 10 mA 的恒定电流下电泳过夜。 通过考马斯蓝染色观察蛋白质泳带。 从胶上切下目标带,将其放到微量离心管中,用 1 ml 50% 乙腈洗两次,每次 3 min。 用胰蛋白酶消化胶中的蛋白质,再将肽电洗脱。 通过窄孔高效液相色谱分离肽。将收集的肽在 ABI 477A 或 494A 机器上进行自动 Edman
2:选择浸泡后加洗次数。F 2F1(01)浸泡后清洗一次,F2F1(10)浸泡后清洗二次,F2F1(11)浸泡后清洗三次。 F wet(湿)-F dry(干)选择板在最终洗完后是湿还是干。 2)旋钮功能: volume(液量):调节阀门的开启时间来调整洗液量1×50?滋l。 washes(清洗次数);设定浸泡前的洗板次数。 pause(暂停):设定洗板过程中的暂停时间(秒) soak(浸泡):设置洗板程序完成后的一段浸泡时间1×0.5min。 3. 注意事项
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