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1个样本/株
「DIFF CRO」助力CHIKV病毒创新药研发,提供整合型解决方案
CHIKV病毒中和抗体检测
「DIFF CRO」提供基于CPE法的中和抗体检测服务(图1),该检测方法灵敏度高、检测迅速,并且该实验方法的特异性、重复性均能满足中和实验的要求,适用于高通量样本的检测。

图1. CHIKV病毒中和抗体检测流程图
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服务内容:
表1.CHIKV血清中和抗体检测服务

针对CHIKV病毒的蛋白酶抑制剂筛选
新型CHIKV病毒蛋白酶抑制剂的发现对于CHIKV病毒药物研发至关重要,其蛋白酶抑制剂靶点为nsP2半胱氨酸蛋白酶。在大量化合物中寻找CHIKV蛋白酶抑制剂的过程中,行业急需一种可实现无需活病毒参与的细胞水平的正向筛选方式,以助力新药研发。
由「DIFF CRO」开发的蛋白酶抑制剂筛选系统,可在细胞水平直接模拟病毒自然感染过程,杜绝漏筛和假阳性等情况。我们以检测和筛选SARS—COV—2药物为例,展示「DIFF CRO」的蛋白酶抑制剂筛选系统的一系列优势:
1)最简便-肉眼观测
DIFF蛋白酶抑制剂筛选系统可通过肉眼直接观察药物反应的荧光变化(图2),进行定性判断。

图2. SARS—COV—2阳性药物GC376添加不同浓度SARS—COV—2的3CL蛋白酶抑制剂后24h,48h,72h细胞GFP表达情况
2)最准确
原理可靠
本系统基于特制质粒的共表达机制,以SARS—COV—2为例,结合重组绿色荧光蛋白(rGFP)和SARS—COV—2的3CL蛋白酶。在该系统中,rGFP序列中嵌入了3CL蛋白酶的特异性切割位点。当3CL蛋白酶功能正常时,会特异性裂解rGFP,导致其荧光功能丧失,荧光强度减弱。相反,当抑制剂有效抑制了3CL蛋白酶的活性时,rGFP无法被切割,维持其完整性并正常发出荧光,荧光强度增强(图3)。药物有效性与荧光强度成正相关,是一种更直观的正向筛选方式。

图3. DIFF蛋白酶抑制剂筛选系统原理图
结果准确
系统实验结果与真病毒检测结果高度一致。使用活病毒进行检测,GC376的IC50值为4.69μM;而采用DIFF筛选系统,IC50值为6.44μM,两种方法测得的IC50值高度相近(图4,5)。

图4. 使用活病毒和DIFF筛选系统测得的IC50值

图5. 添加不同浓度SARS—COV—2蛋白酶抑制剂72h后荧光检测值
3)可进行高通量筛选
系统检测的荧光值低而信噪比好,可联合现有药物库,一周即可筛选1-10万个CHIKV病毒药物候选化合物,快速锁定有效药物(图6)。

图6. 高通量筛选操作示意图
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文献和实验:可能性如下: 灵敏度偏差。调整灵敏度 DIFF散射图异常,WBC/BASO散射图正常,SERVICE DATA中DIFF总数高,表明无溶血剂或溶血剂失效。清通SRV或FDT,FDO溶血剂吸引管道,最后更换试剂。 Q9:WBC总数很高,WBC/BASO,DIFF散射图均异常。(SF-3000) A9:试剂更换时管道位置错误,重新确认;保养时,SRV上管道脱落后接错,重新确认管路图。
fibronectin, as an adhesive subtrate. 11. Incubate at 37C for 20 to 24 h. 12. Remove transwells from 24-well plates and stained with Diff-Quick solution. 13. Scrape off noninvaded cells on the top of the transwell with a cotton swab. 14. Count invaded
) PLT 0~1000 (109/L) 仪器模式: 全血模式 分析仪将吸取20μL(CBC+DIFF模式)或15μL(CBC模式)的全血样本。 预稀释模式 分析仪将吸入80μL(CBC+DIFF模式)或40μL(CBC模式)的稀释样本。
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