- ￥1350
- iCell
- iCell-m037
- 2026年01月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 规格：
1*10⁶Cells/T25培养瓶
细胞介绍
MLO-Y4细胞系来源于在骨钙素启动子控制下表达永生化T-抗原的转基因小鼠，骨细胞是身体中最丰富的骨细胞，但也是最具挑战性的研究，因为它们嵌入在矿化基质中，使它们难以分离。该细胞系MLO-Y4使得研究骨细胞功能更容易。可用于研究流体流动和基质拉伸对骨细胞特异性信号通路激活的影响。
细胞特性
1） 来源：小鼠骨
2） 形态：上皮细胞样 贴壁生长
3） 含量：>1x10^6 细胞数
4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途：仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
一．培养基及培养冻存条件准备
1）准备MEM a 基础培养基 （iCell-0003） 89 %
优质胎牛血清 （iCell-0500） 5 %
小牛血清 （iCell-003b） 5 %
P/S青霉素-链霉素 （iCell-15140-122） 1 %
1、注意：该细胞需要生长在涂有[0.15毫克/毫升]鼠尾1型胶原蛋白的培养皿上,我们推荐使用细胞包被工作液（推荐iCell-8280）或者使用康宁3289细胞培养瓶来进行培养该细胞。单一血清培养不能保证细胞状态。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理
1） 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×10^7个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×10^7个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
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文献和实验Studying Osteocyte Function Using the Cell Lines MLO-Y4 and MLO-A5
We describe the culture and use of MLO-Y4 cells in studies of gene expression, response to fluid flow, and dendrite growth. We also describe how to use the MLO-A5 cells as a model of osteoblast to osteocyte �differentiation and how to study
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