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文献和实验°C). Add 2.5 µl of 6X DNA loading buffer. Prepare the solution for the polyacrylamide gel. Mix 15 ml of 40% acrylamide/bisacrylamide stock solution, 12 ml of 5X TBE buffer, and 32.5 ml of H2O. Add 50 µl of TEMED and 500 µl of freshly prepared 10
with a pipette. Insert the teeth of the comb approximately 1 mm into the gel. Pre-heat the gel at 1700 volts for 15-20 minutes. F: Gel Loading Remove the samples from the freezer. Denature the samples in a thermal cycler at 95°C for 5 mins. Remove
饥饿的 HeLa 和 NIH 3T3 癌细胞系获得的裂解物中的磷酸化蛋白特异性。图示:从复杂生物样品中富集高纯度磷蛋白。用 theThermo Scientific Pierce 磷酸化蛋白富集试剂盒进行 Weste blot 分析,根据试剂盒说明书制备细胞裂解液,富集磷酸化蛋白。利用识别生长因子信号传导相关关键调控蛋白的磷酸化特异性抗体实现蛋白检测。细胞色素 C (pI 9.6) 和 p15Ink4b (pI 5.5) 作为非磷酸化蛋白非特异性结合的阴性对照。FT = 流穿馏分,W = 合并洗脱馏分,E
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