可溶性胸苷激酶1(TK1)重组蛋白

重组蛋白制备工艺优化策略

重组蛋白纯化基本原则蛋白的分离纯化是生物工程下游阶段一个比较重要的部分，尤其在基因工程重组蛋白的分离纯化中，上游过程的许多因素会直接影响到下游蛋白的分离，充分利用上游对下游的影响，对蛋白的纯化做一个全面的考虑和整体的设计。是否带有亲和标签，His标签，GST标签等，不同的亲和标签选择不同的纯化方案；可能是可溶性表达，可能形成包涵体，可溶性的蛋白往往需要复杂的纯化步骤，而包涵体易于分离，纯度较高，但回收具有生物活性的蛋白却变的相当困难，需要对聚集的蛋白进行变复性，通常活性蛋白的得率比较低；是否

重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量

结果。 5.选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－20 o C保存，准备做下一步分析及纯化。 二、重组蛋白质的分离纯化 重组蛋白质的可溶性鉴定 1.将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 o C低温冰箱中放置10 min。 2.冰中解冻。 3.在冰浴上用超声破碎仪破菌6次，每次10 sec，间歇10 sec，电压200-300 V

蛋白复性（二）-基因重组蛋白质的体外复性

重组菌的生长温度，降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法，较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用，从而可减少包涵体的形成[4]。 2、 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂，培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应，在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输，其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇（诱导热休克蛋白的表达）、低分子量的巯基或二硫化合物（影响细胞周质的还原态，从而影响