气管组织解离试剂盒

产品简介: 

品牌：bestopcell/百奥益康  

货号：BA3328 

产品名称：气管组织解离试剂盒 

产品规格：10 rxns 

品牌介绍: 

  北京百奥益康医药科技有限公司是一家专注单细胞分子检测创新技术及临床转化应用的国家高新技术企业，由中国科学院科学家、海归科学家、临床专家、国内知名高通量检测资深研发专家联合创立，核心团队在单细胞分子检测领域深耕近10年，在单细胞分子检测技术创新、大数据智能分析与临床转化方面具有丰富经验。 


在高通量单细胞测序实验中，制备出高质量的单细胞悬液是实验成功的关键，百奥益康团队累积了10,000+个样本的单细胞测序服务经验，涉及150+种不同类型的组织，具有丰富的新鲜组织解离的经验。在此基础上，百奥益康自主研发了气管组织解离试剂盒，利用该试剂盒，可高效的制备出气管组织高质量的单细胞悬液。

 

产品优势

操作便捷：操作简单便捷，可轻松实现气管组织的解离，制备出高质量的单细胞悬液。

活性较高：利用该试剂盒制备的单细胞悬液活性较高，结团率较低。

应用场景：适用于人、小鼠等哺乳动物气管组织单细胞悬液制备，可用于单细胞测序、 细胞培养或其他细胞相关检测。

测试效果

我们对新鲜的小鼠气管组织进行了实验，结果显示利用气管组织解离试剂盒解离后获得的细胞悬液质量较好，能满足单细胞转录组测序实验。

 

测试流程：

 

 

 

测试结果：

利用气管组织解离试剂盒制备的气管组织细胞悬液质检结果

 

 

项目实测

目前我们已完成大量用该解离试剂盒处理的样本的单细胞测序项目。

 

 

部分项目实测气管组织解离后数据表现

 

 

 

 

部分项目实测气管组织解离后单细胞测序分群表现

注：数据均经对应项目的客户同意后发布

 

产品 FAQ

1.    Q：解离气管组织时，按步骤先用解离液 1 消化 15-30 分钟，离心后发现组织块仍较大，无法用解离液 2 充分重悬，是什么原因？该如何处理未充分消化的组织块？

A：组织块较大是因解离液 1 未充分降解气管外层的软骨和纤维组织。处理方法：①将离心后的组织块重新剪碎至 0.2mm³ 以下（比首次剪碎小 1/2），用 1mL PBS 反复冲洗，去除残留解离液 1；②补加 2mL 解离液 1，37℃孵育 10 分钟，期间每隔 3 分钟轻轻摇晃，增强酶解效果；③再次离心后，组织块可缩小至适宜尺寸，用解离液 2 重悬时能均匀分散，确保后续酶解充分。

2.    Q：解离哮喘模型小鼠的气管组织时，细胞悬液中出现大量黏稠分泌物，包裹细胞导致过滤困难，该如何去除这些分泌物？

A：黏稠分泌物是哮喘气管组织分泌的黏蛋白与酶解产物混合形成的。去除方法：①在解离液 2 消化时，加入 100μL 0.1% 透明质酸酶（自备，无细胞毒性），降解分泌物中的黏多糖成分；②过滤前将细胞悬液在 4℃、500×g 离心 3 分钟，弃上层黏稠层；③用含 2% FBS 的 PBS 冲洗 70μm 细胞筛 3 次，确保分泌物随滤液流出，避免堵塞筛网，可使过滤速度提升 50%。

3.    Q：使用杂交炉酶解解离液 2 时，转速 20-30 转 / 分钟，却发现离心管内液体形成漩涡，导致组织块聚集在管底无法酶解，是什么原因？该如何避免漩涡产生？

A：漩涡产生是因气管组织含密度较高的软骨碎片，杂交炉转速过高时带动液体旋转。避免方法：①将杂交炉转速降至 15-20 转 / 分钟，减少液体旋转力度；②在离心管内放入 1 颗无菌玻璃珠（直径 2mm，自备），利用玻璃珠碰撞分散组织块；③每隔 20 分钟手动颠倒离心管 1 次，确保组织块与解离液 2 充分接触，可使酶解均匀性提升 70%。

4.    Q：试剂盒中的解离液 1 和解离液 2 开封后，-20℃保存 5 个月，使用时发现解离液 2 酶解效率下降（细胞得率仅为原来的 55%），是试剂失效了吗？该如何判断并补救？

A：解离液开封后 - 20℃保存有效期为 3 个月（未开封 2 年），5 个月可能导致酶活性下降。判断方法：①取 50μL 解离液 2 与少量气管组织碎块混合，37℃孵育 30 分钟，若组织块无明显变化，说明酶活性不足；②补救方法：将解离液 2 用量增加 50%，延长消化时间至 2 小时，同时在解离液 2 中加入 50μL 1% BSA（自备），增强酶稳定性，可使细胞得率恢复至原来的 80% 左右（不建议用于单细胞测序）。
5.    Q：步骤 10 用 6mL RPMI 1640 培养基涮洗消化管，若涮洗后发现管壁仍黏附大量上皮细胞（气管目标细胞），导致细胞得率低，该如何优化涮洗操作？

A：上皮细胞黏附是因气管上皮细胞含黏附分子，易附着在离心管内壁。优化方法：①涮洗前用含 5% FBS 的 PBS 润洗离心管内壁，形成保护膜，减少细胞黏附；②将 6mL 培养基分 3 次涮洗（每次 2mL），每次涮洗时反复颠倒离心管 10 次，确保管壁每个区域都被冲洗；③涮洗后用 1mL 枪头轻轻刮擦管壁，再用少量培养基冲洗，可使上皮细胞回收率提升 40%。

6.    Q：解离新生小鼠（出生 5 天内）气管组织时，细胞活性仅 30%，远低于成年小鼠的 75%，是什么原因导致的？该如何调整操作保护幼龄气管细胞？

A：幼龄气管细胞细胞膜脆弱，易受酶解液和机械力损伤。调整方法：①将解离液 1 消化时间从 15-30 分钟缩短至 10-15 分钟，解离液 2 消化时间缩短至 30-40 分钟，减少酶损伤；②酶解时使用水浴锅，每隔 5 分钟轻轻摇晃（避免剧烈振荡），降低机械力冲击；③清洗步骤中，用含 10% FBS 的 PBS 替代常规 5% FBS 的 PBS，增强细胞膜保护，可使幼龄气管细胞活性提升至 65% 以上。

7.    Q：步骤 5 和 6 离心后 “不要吸取组织”，若不小心吸走少量组织块，会对后续实验产生什么影响？该如何回收吸走的组织块？

A：吸走组织块会导致目标细胞流失，细胞得率降低 20%-30%。回收方法：①若组织块仍在吸液枪头内，立即将枪头内液体挤回离心管；②若已吸入上清液，将上清液收集到新离心管，4℃、300×g 离心 8 分钟，弃上清，将沉淀与原组织块合并；③后续酶解时补加 0.5mL 解离液 2，延长消化时间 10 分钟，弥补细胞损失，可使细胞得率恢复至正常水平的 85%。

8.    Q：解离后细胞悬液中出现大量透明软骨碎片，干扰细胞计数，该如何去除这些软骨碎片？

A：软骨碎片是气管外层软骨组织酶解不完全的产物。去除方法：①酶解后过滤前，将细胞悬液静置 5 分钟，软骨碎片会沉降至管底，吸取上层细胞悬液先过滤；②用 70μm 细胞筛过滤时，用含 2% FBS 的 PBS 反复冲洗筛网，软骨碎片会留在筛网上，用镊子轻轻刮除；③若仍有残留，用 40μm 细胞筛二次过滤（仅保留滤液），可去除 90% 以上的软骨碎片，不影响上皮细胞回收率。

9.    Q：步骤 15 使用 BA3311 红细胞裂解液去除红细胞时，发现气管上皮细胞活性从 80% 降至 50%，该如何优化裂红操作减少上皮细胞损伤？
A：上皮细胞损伤是因裂红液对气管上皮细胞有轻微毒性。优化方法：①将裂红液稀释 1 倍（用 PBS），降低浓度；②孵育温度控制在 4℃，时间缩短至 3-4 分钟，显微镜下观察到红细胞裂解后立即终止；③裂红后用含 10% FBS 的 PBS 清洗 3 次（常规 1 次），充分去除残留裂红液，可使气管上皮细胞活性维持在 70% 以上。

订购须知: 

1）所有产品仅可用于科研目的的生物学实验（forresearchuseonly），严禁用于人体或动物的医疗目的