皮肤组织解离试剂盒

产品简介: 

品牌：bestopcell/百奥益康  

货号：BA3307 

产品名称：皮肤组织解离试剂盒 

产品规格：10 rxns 

品牌介绍: 

  北京百奥益康医药科技有限公司是一家专注单细胞分子检测创新技术及临床转化应用的国家高新技术企业，由中国科学院科学家、海归科学家、临床专家、国内知名高通量检测资深研发专家联合创立，核心团队在单细胞分子检测领域深耕近10年，在单细胞分子检测技术创新、大数据智能分析与临床转化方面具有丰富经验。 

 

在高通量单细胞测序实验中，制备出高质量的单细胞悬液是实验成功的关键，百奥益康团队累积了10,000+个样本的单细胞测序服务经验，涉及150+种不同类型的组织，具有丰富的新鲜组织解离的经验。在此基础上，百奥益康自主研发了皮肤组织解离试剂盒，利用该试剂盒，可高效的制备出皮肤组织高质量的单细胞悬液。

 

 

 

产品优势

 

操作便捷：操作简单便捷，可轻松实现皮肤组织的解离，制备出高质量的单细胞悬液。

 

 

活性较高：利用该试剂盒制备的单细胞悬液活性较高，结团率较低。

 

 

应用场景：适用于人、小鼠等哺乳动物皮肤组织单细胞悬液制备，可用于单细胞测序、 细胞培养或其他细胞相关检测。

 

 

 

 

测试效果

 

 

我们对新鲜的小鼠皮肤组织进行了实验，结果显示利用皮肤组织解离试剂盒解离后获得的细胞悬液质量较好，能满足单细胞转录组测序实验。

 

 

测试流程：

 

 

 

 

 

测试结果：

 

 

 

利用皮肤组织解离试剂盒制备的皮肤组织细胞悬液质检结果

 

 

项目实测

 

 

目前我们已完成大量用该解离试剂盒处理的样本的单细胞测序项目。

 

 

部分项目实测皮肤组织解离后数据表现

 

 

 

 

 

 

 

部分项目实测皮肤组织解离后单细胞测序分群表现
注：数据均经对应项目的客户同意后发布

 

 

 

产品FAQ

1.    Q：这款试剂盒适用于所有哺乳动物的皮肤组织吗？对皮肤组织的状态（如新鲜、冻存）有要求吗？能否用于皮肤肿瘤组织？

A：试剂盒适用于人、小鼠等常见哺乳动物的正常皮肤组织，暂不建议直接用于皮肤肿瘤组织 —— 肿瘤组织的细胞密度和 extracellular matrix 成分与正常皮肤差异大，需联系厂家确认是否需调整酶解参数。同时，仅支持新鲜皮肤组织解离，冻存组织会因冰晶损伤细胞结构，导致解离后细胞活性极低；若需使用冻存组织，需先通过专用冻存复苏方案处理，再尝试解离。

 

2.    Q：试剂盒标注 “10 rxns”，每次实验中皮肤组织解离液 1 和解离液 2 的用量分别是多少？若单次实验仅需处理 50mg 组织，能否按比例减少试剂用量？

A：每次实验（200mg 组织）需用 210μL 皮肤组织解离液 1 和 280μL 皮肤组织解离液 2。若处理 50mg 组织（为标准用量的 1/4），可按比例减少试剂用量（解离液 1 52.5μL+RPMI 1640 培养基 697.5μL，解离液 2 70μL+RPMI 1640 培养基 680μL），但需注意：试剂体积过小时，移液误差会增大，建议尽量凑整至 100μL 以上（如处理 100mg 组织，用量减半）；若必须处理 50mg，需使用高精度移液器，确保试剂比例准确。

 

3.    Q：步骤 6 中，小鼠皮肤消化 0.5 小时、人皮肤消化过夜，其余哺乳动物消化时长 “1 到数小时不等”，具体该如何判断消化终点？若消化时间不足或过长，会有什么影响？

A：判断消化终点需结合 “定时质检”：每隔 30 分钟取 10μL 悬液，台盼蓝染色后镜检，若细胞活性≥70% 且组织块占比≤10%，即可停止消化。消化不足会导致组织未完全解离，单细胞得率低，后续过滤会残留大量组织碎片；消化过长会使细胞过度酶解，细胞膜破损，活性降至 60% 以下，无法用于单细胞测序或细胞培养。例如处理大鼠皮肤，建议先按 0.5小时消化，再根据质检结果调整（活性高则延长 15 分钟，活性低则立即停止）。

 

4.    Q：步骤 3 和步骤 6 均提到 “37℃水浴锅或杂交炉”，两种设备的操作差异仅在于 “手动摇晃” 和 “自动转速” 吗？选择哪种设备对解离效果更优？

A：核心差异除混匀方式外，还有温度稳定性：杂交炉的控温精度（±0.5℃）高于水浴锅（±1℃），且自动转速（20-30 转 / 分钟）能让组织与解离液均匀接触，避免局部消化不均；水浴锅需手动摇晃，若力度或频率不一致，易导致部分组织消化过度、部分未消化。选择上，样本量多（≥5 份）或追求实验重复性时，杂交炉更优；样本量少（1-2 份）且无杂交炉，水浴锅手动操作也可，但需固定每 4 分钟摇晃 1 次，每次 10 秒。

 

5.    Q：步骤 8-10 要求用 70μm 细胞筛过滤并涮洗离心管 3 次，共收集 12mL 滤液，若省略 1 次涮洗，会对实验结果产生什么影响？能否用 40μm 细胞筛替代 70μm？

A：省略 1 次涮洗会损失约 1/3 的残留细胞，导致最终细胞得率降低 20%-30%，尤其人皮肤消化过夜后，细胞易吸附在管壁，必须 3 次涮洗。不能用 40μm 细胞筛替代：皮肤解离后的单细胞直径约 10-15μm，70μm 筛网可过滤组织碎片且不截留细胞；40μm 筛网孔径过小，易被细胞团或纤维杂质堵塞，导致过滤困难，同时可能挤压细胞，降低活性。

 

6.    Q：步骤 12-13 用含 5% FBS 的 PBS 清洗沉淀两次，FBS 的作用是什么？能否用不含 FBS 的 PBS 或血清替代物替代？

A：FBS 的核心作用是中和残留的解离液活性，防止酶继续损伤细胞，同时为细胞提供营养，维持活性。不能用不含 FBS 的 PBS 替代，否则残留酶会持续破坏细胞膜，导致清洗后细胞活性下降 30% 以上；血清替代物（如 BSA）仅能提供营养，无法中和酶活性，也不建议替代。若需无血清实验（如某些细胞分选场景），需在清洗后额外加入 “酶抑制剂”（需联系厂家获取适配型号），否则无法保证细胞活性。

 

7.    Q：说明书提到 “DMEM 培养基可替代 RPMI 1640 培养基”，替代后是否需要调整试剂用量或消化时间？两种培养基的选择对细胞活性有影响吗？

A：替代后无需调整试剂用量和消化时间 ——DMEM 与 RPMI 1640 均为哺乳动物细胞常用基础培养基，虽氨基酸、维生素含量有差异，但均能为皮肤组织解离提供适宜的渗透压和 pH 环境，对解离效率无影响。对细胞活性的影响极小：实验数据显示，用两种培养基解离小鼠皮肤后，细胞活性差异≤5%，可根据实验室现有库存选择，无需特意更换。

 

8.    Q：若解离后细胞悬液中红细胞较多，需用 BA3311 红细胞裂解液去除，应在哪个步骤操作？裂解时需注意什么？

A：应在步骤 13 之后、步骤 14 之前操作：步骤 13 完成两次清洗并弃上清后，加入 1mL BA3311 红细胞裂解液，室温孵育 5 分钟，4℃、300×g 离心 5 分钟，弃上清，再用 5mL 含 5% FBS 的 PBS 重悬（相当于额外增加 1 次清洗），之后进入步骤 14。注意：裂解时间不可超过 8 分钟，否则会损伤皮肤细胞；若红细胞过多（如皮肤样本含大量毛细血管），可重复裂解 1 次，但需再次清洗，避免裂解液残留。

 

9.    Q：试剂盒需 - 20℃保存，若运输过程中冰袋融化，试剂在 4℃环境下放置了 2小时，还能继续使用吗？反复冻融会有什么影响？

A：4℃放置 2 小时可继续使用，但需立即放回 - 20℃，且后续使用前需充分混匀。反复冻融会导致解离液中的酶活性下降：冻融 1 次，酶活性降低 10%-15%；冻融 3 次以上，活性不足 50%，无法有效解离组织。建议收到试剂盒后，立即将解离液 1 和解离液 2 分装为单次用量（如 210μL / 管解离液 1、280μL / 管解离液 2），密封后 - 20℃保存，每次实验取 1 管，避免反复冻融。

 

10.    Q：步骤 15 质控后要求 “立即进行后续实验”，若无法立即开展，制备好的细胞悬液可短期保存吗？保存条件和时间有什么限制？

A：可短期保存，条件为 4℃冰箱密封保存，时间不超过 2 小时，且需避免反复摇晃。保存时需用含 5% FBS 的 PBS 将细胞浓度调整至 1×10⁶-1×10⁷个 /mL，置于低吸附离心管中。超过 2 小时后，细胞活性会明显下降（每小时下降 10%-15%），且会产生新的细胞碎片；若保存超过 4 小时，细胞基本丧失活性，无法用于下游实验。使用前需重新质检，活性≥65% 方可使用。

订购须知: 

1）所有产品仅可用于科研目的的生物学实验（forresearchuseonly），严禁用于人体或动物的医疗目的