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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
20
- 英文名:
Salmonella paratyphi C
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海再康生物科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
Salmonella paratyphi C. PCR Kit
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液,浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。使用方便快捷,能避免PCR操作过程中的污染,使用时只需取适量2×TaqPCR MasterMix溶液,加入模板和引物,并加入去离子水补足体积,使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀,操作需在冰上进行。
Taq:扩增效率最高的耐热 DNA 聚合酶,其扩增速度约为 1-2kb/min。扩增碱基出错率为 10-5 左右。其产物未端带有 A,可直接用于 TA 克隆。
Pfu:目前保真度最高的耐热 DNA 聚合酶,碱基出错率为 10-6,但扩增效率低于 Taq 酶, 一般能很好的扩增 2kb 以下的片段。其扩增速度约为 500bp/min 左右。其产物为平未端,须加 A后才可用于 TA 克隆。
Taq Plus:Taq 和 Pfu 的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比 Pfu 高, 保真度比 Taq 好。其扩增速度约为 1000bp/min 左右。其产物未端带有 A,可直接用于 TA 克 隆。 含染料 PCR MasterMix 反应完后可以直接电泳检测。不含染料的 PCR MasterMix 反应完后 加入上样缓冲液后电泳检测。
| 产品名称 | 方法 | 规格 | 价格 |
| 丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌LAMP试剂盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
| 丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌PCR试剂盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
| 丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
| 丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 | 50次 | 3490元 |
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌,与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分
| 成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
| PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
| 超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
| 丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌PCR引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
| 丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
试剂四 | 50 μL(黄盖) |
| 核酸释放剂(试用装) | 试剂五 | 20 次(1 mL,绿盖) |
| 使用手册 | 试剂六 | 1 份 |
自备试剂:样品 DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20 次核酸释放剂试用装,其使用手册可以从本公司网站订购核酸释放剂。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 补骨脂 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
| 成分 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR 阳性对照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
| PCR 阴性对照(水) | -- | 18 μL | -- |
| PCR 阳性对照(丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌PCR阳性对照的 1000 倍稀释液) |
-- | -- | 18 μL |
- 按下表设置 PCR 反应:
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min |
| PCR 反应(35 个循环) | 95℃ | 15 sec |
| 57℃ | 15 sec | |
| 72℃ | 40 sec | |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
丙型副伤 寒 沙 门 氏 菌PCR试剂盒常见问题与解决方法:
| 常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 |
PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR反应条件。 |
| PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。 | |
| 引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。 |
不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
| 加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系,或减少裂解液的用量。 | |
| 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
| 模板加入量不适合。 | 在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。 | |
| PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 |
PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
| PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
| 配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 |
操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
| 样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。 |
特别提示:本公司的所有产品仅用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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文献和实验),猪霍乱沙门氏菌(S.choleraesuis),肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)等十余种。一般可简称伤寒杆菌,甲、乙、丙型副伤寒杆菌,鼠伤寒杆菌,猪霍乱杆菌,肠炎杆菌。 一、生物学性状 (一)形态与染色 大小0.6~1.0×2~3um,无芽胞,一般有鞭毛,无荚膜,多数有菌毛,革兰氏阴性杆菌。 (二)培养特性 兼性厌氧菌,在普通
细菌分类 classification of bacteria
,并将裂殖菌纲分成 10目:( i)假单胞菌目;( ii)鞘杆菌目;( iii)生丝微菌目;( iv)真杆菌目;( v)放线菌目;( vi)核衣细菌目;( vii)贝日阿托氏菌目;( viii)粘球菌目;( ix)螺旋体目;( x)枝原体目。( 2)在该书第 8版( 1974年)中虽分作原核生物界的细菌门,但由于加强了该书的便览性质,因而在其以下等级不再细分,只把全体分作 19个部门,在各部门中,只在可能的情况下才把属编成科和目。( 3)所谓细菌类,和其它的真核菌都是构成不同于植物界的另一个菌界
【材料】 伤寒杆菌,甲、乙型副伤杆菌,痢疾杆菌诊断血清,载玻片,生理盐水等。【方法与结果】 根据初步鉴定结果,用已知诊断血清作玻片凝集试验,如发生凝集,即可确定。如疑集阴性,应复查后再定。 (二)继续鉴定:根据需要可进一步作生化反应,血清学分型等鉴定。 【注意事项】 1. 作分离培养时宜取脓血便接种于鉴别培养基或选择培养基上。 2. 挑取可疑菌落时,每份标本可选取2~3个菌落,每个菌落接种一支双糖管。 3. 玻片
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