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- 中国
- 2025年11月21日
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- 文献和实验
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大量
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1年
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再康生物
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低温运输，-20℃保存
- 规格：
1000 U
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文献和实验，可用于确定 cDNA 5'和3'末端的未知序列。通常，这些方法分别被称为 5' RACE和 3' RACE。 在 5'RACE中，任何长度的（甚至包括未到达mRNA 5'末端的）第一链 cDNA 都将具有添加序列（即同聚物尾部结构或接头），随后通过 PCR 进行扩增。为了最大化全长 cDNA 的合成，应选择具有最小 RNA 酶 H 活性、高持续合成能力和高热稳定性的逆转录酶。 在 3'RACE 中，全长 cDNA 并不重要，因为不会扩增 PCR 起始位点的上游序列。但是，最好选用可生成长 cDNA
RTase 两大类：AMV RTase 的 RNase H 活性强，合成长度短，合成量低，热稳定性好（42～55℃）；MMLV RTase 的 RNase H 活性弱，合成长度长，合成量高，热稳定性差（37～42℃）。由于 RNase H 酶具有降解 RNA 模板的功能，所以在逆转录时应该优先选择 RNase H 活性弱的 MMLV ，而且后期经过基因工程改造，MMLV 热稳定性已达到质的飞跃。以 Yeasen 的 Hifair® Ⅲ 逆转录酶（11141）为例，该酶经基因工程改造，删除了 RNase
合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。SuperScriptⅡ逆转录酶，RNaseH- 的MMLV逆转录酶及ThermoScript逆转录酶，RNaseH- 的 AMV，比MMLV和AMV得到更多量和更多全长的cDNA（图3）。RT-PCR灵敏度会受cDNA合成量的影响
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