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- 再康生物
- ZK-0108584
- 国产/进口
- 2025年11月20日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
20
- 英文名：
Neisseria meningitidis Group W
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海再康生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50次
英文名称：Neisseria meningitidis Group W PCR Kit
产品规格：50T/盒
探针法原理：
探针的基本原理是利用扩增过程中 Taq 酶的 5’核酸外切酶活性切割与靶序列结合的寡核苷酸探针，该探针 5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团并被磷酸化以防止探针在 PCR 过程中延伸，当引物延伸至寡核苷酸结合位置时，Taq 酶可以将其切割成小片段，使报告基团和淬灭基团分开并发出荧光，经过检测伴随扩增产物增加过程中荧光强度的增长对样本进行定量分析。
所谓的实时荧光定量PCR 就是通过对PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。在实时荧光定量PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。
RT-qPCR是由三个步骤组成:
1.反转录:依赖反转录酶将RNA反转录成cDNDA;
2.扩增:用PCR的方法扩增cDNA;
3.检测:实时检测和定量扩增的产物
产品特点：
- 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据脑膜炎奈瑟菌W群高度保守区设计，不会跟其他病毒的RNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量RT-PCR反应。
- 本产品只能用于科研，不能用于临床。
| 编号 | 成分 | 规格 |
| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |
| 试剂四 | 脑膜炎奈瑟菌W群探针法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 试剂五 | 脑膜炎奈瑟菌W群qRT-PCR探针 | 50μL |
| 试剂六 | 脑膜炎奈瑟菌W群探针法qRT-PCR阳性对照(1×10E8拷贝/μL) | 50 μL |
| 产品 说 明 书 | 1份 | |
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂：样品 RNA。
使用方法：
一、稀释标准曲线样品（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 带芯枪头分别加入45μL荧光RT-PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同）。
- 在 7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒RNA提取试剂盒。
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照（用水做模板），1个用于PCR阳性对照（用第4号管的阳性对照稀释液做模板）。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：
| 成分 | 样品管 N+2 个 |
RT-PCR 阴性 对照 管 |
标准曲线 样品管 （2-7 管） |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 各10μL | 10μL | 各10μL |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |
| 脑膜炎奈瑟菌W群qRT-PCR探针 | 各1μL | 1μL | 各1μL |
| 脑膜炎奈瑟菌W群探针法qRT-PCR引物混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |
| 待测样品RNA模板 | 各5μL | 不加 | 不加 |
| 超纯水 | 不加 | 5μL | 不加 |
| 第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号） | 不加 | 不加 | 各 5 μL（2 号 样到 2 号管， 3 号样到 3 号 管…） |
- 盖上盖子后上机，按下面参数进行 qRT-PCR：
| 过程 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| PCR反应 （40个循环） |
94℃ | 15 sec |
| 60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的荧光信号） |
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 RNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大 于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该 小于或等于 30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小 于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。若重复结果 Ct 值小于 40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。
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文献和实验脑膜炎奈瑟菌结合型疫苗 在20世纪80年代末开始了对C群脑膜炎球菌结合疫苗的研制，经多次临床试验对儿童和幼儿都是安全、有免疫原性和可引发免疫记忆的(Costantino等，1992；Anderson等，1994；Twumasi等，1995；Lieberman等，1996；Fairley等，1996；Leach等，1997；Borrow等，2000)。 抗血清C群脑膜炎结合疫苗由几家英国厂商开发并先后取得文号(1999年10月一2000年8月)，自1999年
脑膜炎奈瑟菌的生物学特性是检验主管技师考试中所包含的内容。医学教育网收集整理了部分相关信息供学员参考。 （1）形态与染色：为革兰阴性双球菌，菌体呈肾形，成对排列，坦面相对，菌体直径0.6～1.5μm，在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。 （2）培养特性：营养要求高，属苛养菌，必须在含有血清或含有多种氨基酸，无机盐等物质的培养基上生长良好。 （3）生化反应：绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气（因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，借此与之鉴别），触酶
18~24h，无特殊要求的细菌均可生长。少数生长缓慢的细菌需要培养3-7d甚至1个月才能生长。为使孵育箱内保持一定的湿度，可在其内放置一杯水。对培养时间较长的培养基，接种后应将试管口塞好棉塞或硅胶塞后用石蜡-凡士林封固，以防培养基干裂。 2．二氧化碳培养 某些细菌，如肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、布鲁氏菌和流感嗜血杆菌等的培养，特别是在初次分离时，须在5%~10 %二氧化碳环境中培养才能生长。常用的培养法如下。 （1）二氧化碳培养箱法：二氧化碳孵箱能自动调节二氧
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