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上海再康
Reactive Ozkgen Species Assay Kit 活性氧（ROS）检测试剂盒检测原理
Reactive Ozkgen Species Assay Kit 活性氧（ROS）检测试剂盒
冰袋运输。-20℃干燥避光保存，有效期一年。
检测步骤
1）装载探针
对于刺激时间较短(通常2小时以内)的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照及感兴趣药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照及感兴趣药物刺激细胞，后装载探针。
：仅适用于贴壁细胞。
按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA10 umol/L。
（2）去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，对于六孔板通常不少于100ul。
37℃细胞培养箱内孵育20 min。用无血清培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针：适用于贴壁细胞和悬浮细胞。
（1）按照1:1000用无血清培养液DCFH-DA，终浓度为10 umol/L。
（2）收集好的细胞悬浮于稀释好的DCFH-DA，细胞密度为1.0×106~2.0×107。
（3）37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
（4）用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，或把细胞等分成若干份后刺激细胞。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
2）检测
是一种基于荧光染料DCFH-DA（2,7-Dichlorodi -hydrofluorescein diacetate）的荧光强度变化，定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法。
DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜。进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不会通透细胞膜，因此探针很容易被积聚在细胞内。细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。在最大激发波长480nm，最大发射波长525nm处，使用荧光显微镜，流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号，并根据阳性对照Rosup的荧光信号来分析活性氧的真正水平。
产品组分| 编号 | 组分 | 规格 | 保存方法 |
| 50101-A | DCFH-DA（10mM） | 0.1 mL | -20℃，避光保存 |
| 50101-B | 活性氧阳性对照（Rosup, 50mg/mL） | 1.0 mL | -20℃，避光保存 |
冰袋运输。-20℃干燥避光保存，有效期一年。
检测步骤
1）装载探针
对于刺激时间较短(通常2小时以内)的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照及感兴趣药物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照及感兴趣药物刺激细胞，后装载探针。
：仅适用于贴壁细胞。
按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA10 umol/L。
（2）去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，对于六孔板通常不少于100ul。
37℃细胞培养箱内孵育20 min。用无血清培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针：适用于贴壁细胞和悬浮细胞。
（1）按照1:1000用无血清培养液DCFH-DA，终浓度为10 umol/L。
（2）收集好的细胞悬浮于稀释好的DCFH-DA，细胞密度为1.0×106~2.0×107。
（3）37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。
（4）用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，或把细胞等分成若干份后刺激细胞。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。
原位装载探针法：激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
收集细胞后装载探针：用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，也可以用激光共聚焦显微镜直接观察。
3）参数设置
使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似，可以用FITC的参数设置检测DCF。的激发光谱和发射光谱参考下图。
其他事项说明
Reactive Ozkgen Species Assay Kit 活性氧（ROS）检测试剂盒阳性对照推荐按照1∶1000的比例使用。如用1μL的阳性对照刺激1mL装载好探针的细胞。通常刺激后20～30分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。
（2）对于某些细胞，如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1∶2000～1∶5000
稀释DCFH-DA，使装载探针时DCFH-DA的浓度为2～5μmol/L。探针装载的时间也可以根据情况在15～60分钟内适当进行调整。
（3）活性氧阳性对照（Rosup）仅仅用于作为阳性对照的样品，并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。
注意事项
- 探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
- 探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。DCF的激发光谱和发射光谱见上图。
- 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。
Reactive Ozkgen Species Assay Kit 活性氧（ROS）检测试剂盒
zk-axbz-093 小鼠前成骨细胞 MC-3T3 规格25毫升/株.
zk-axbz-094 小鼠成骨细胞系 MC3T3-E1 规格25毫升/株.
zk-axbz-095 鼠胚成骨细胞 3T3-E1 规格25毫升/株.
zk-axbz-096 大鼠肾小管上皮细胞，ATCC：CRL-6509 NRK 规格25毫升/株.
zk-axbz-097 大鼠肾细胞 NRK-52E 规格25毫升/株.
zk-axbz-098 小鼠饲养层上皮细胞 HPT-8 规格25毫升/株.
zk-axbz-099 LLC:Leuwis肺癌细胞 规格25毫升/株.
zk-axbz-100 化学转化小鼠鼻咽上皮细胞 TMNE 规格25毫升/株.
zk-axbz-101 大鼠鼻咽癌细胞 FAT 规格25毫升/株.
zk-axbz-102 小鼠大肠癌细胞 CT-26.WT 规格25毫升/株.
zk-axbz-103 小鼠结肠癌细胞 CMT93 规格25毫升/株.
zk-axbz-104 大鼠埀体瘤细胞 GH3 规格25毫升/株.
zk-axbz-105 产EBV的绒猴白细胞 B95-8 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
zk-axbz-106 小鼠艾氏腹水瘤细胞TCM15 S180 规格25毫升/株.
zk-axbz-107 小鼠胚胎成纤维细胞 T6-Swiss albino 规格25毫升/株.
zk-axbz-108 小鼠皮下结缔组织细胞 A9 规格25毫升/株.
zk-axbz-109 蚊子细胞 C6/36 规格25毫升/株.
zk-axbz-110 鼠小脑细胞 C8-D1A 规格25毫升/株.
zk-axbz-111 猫肾细胞 CRFK 规格25毫升/株.
zk-axbz-112 猫肾细胞 F81 规格25毫升/株.
zk-axbz-113 中国仓鼠卵巢细胞 CTLA4 Ig-24 规格25毫升/株.
zk-axbz-114 非洲绿猴非洲绿猴肾细胞 CV-1 规格25毫升/株.
zk-axbz-115 牛胚气管细胞 EBTr (NBL-4) 规格25毫升/株.
zk-axbz-116 恒河猴胚肾细胞 FRhK-4 规格25毫升/株.
zk-axbz-117 大鼠肝癌细胞 H4-ⅡE 规格25毫升/株.
zk-axbz-118 大鼠肝细胞瘤 H4-II-E-C3 规格25毫升/株.
zk-axbz-119 大鼠心肌细胞 H9c2(2-1) 规格25毫升/株.
zk-axbz-120 大鼠肾小球系膜细胞EC (HBZY－1) HBZY－1 规格25毫升/株.
zk-axbz-121 绿猴恒河猴肾细胞 LLC-MK2 规格25毫升/株.
zk-axbz-122 牛肾细胞 MDBK (NBL-1) 规格25毫升/株.
zk-axbz-123 貂肺上皮细胞 Mv.1.Lu(NBL-7) 规格25毫升/株.
zk-axbz-124 小鼠脑神经瘤细胞 Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] 规格25毫升/株.
zk-axbz-125 大鼠肺泡巨噬细胞 NR8383 规格25毫升/株.
zk-axbz-126 负鼠肾细胞 OK 规格25毫升/株.
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