NF-κB激活－核转运检测试剂盒

NF-κB激活－核转运检测试剂盒(NF-κB Activation，Nuclear Translocation Assay Kit)是通过免疫荧光染色检测NF-κB的主要亚基p65是否转运到细胞核内从而确认NF-κB是否被激活的检测试剂盒。本试剂盒中的NF-κB p65抗体可以识别人、小鼠或大鼠的NF-κB p65亚基，因此本试剂盒可以检测人、小鼠或大鼠细胞或组织中的NF-κB核转运激活。
      本试剂盒提供了固定液、洗涤液、封闭液、一抗、荧光标记二抗、细胞核荧光染色液、封片液，使用时不必再配制其它任何溶液。提供了细胞核荧光染色液，可以把细胞核染成蓝色荧光，这样可以清楚地判断NF-κB是否被转运到细胞核内而被激活。
      NF-κB是一种常见的转录因子，可以被炎症因子、生长因子或趋化因子等激活。常见的炎症因子(包括Interleukin-1和TNF-α等)都可以激活NF-κB。NF-κB由两类亚基形成同源或异源二聚体。一类亚基包括p65(也称RelA)、RelB和C-Rel；另一类亚基包括p50和p52。最常见的NF-κB亚基组成形式为p65/p50或p65/p65。
      NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物，分布在细胞浆中。在炎症因子、生长因子或趋化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情况下，IκB-α会在Ser32和Ser36被磷酸化，随后被泛素-蛋白酶体途径降解。NF-κB和IκB-α解聚后，其核定位序列被暴露，从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。通过免疫染色检测NF-κB的主要亚基p65是否被转移到细胞核内，就可以判断NF-κB是否被激活。
      本NF-κB激活－核转运检测试剂盒仅染色p65，不染色RelB、C-Rel、p50和p52。
      使用本试剂盒染色后NF-κB呈红色荧光，细胞核呈蓝色荧光。
      如果检测组织切片或6孔板内的细胞样品，至少可以检测50个样品，如果检测96孔板内的样品，至少可以检测250-500个样品。 
包装清单：

保存条件：
      固定液和细胞核染色液-20℃保存，其余试剂均4℃保存，半年有效。其中抗兔Cy3和细胞核染色液需避光保存。
注意事项：
      固定液对人体有害，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
      免疫荧光染色时，请注意回收使用过的NF-κB p65抗体和抗兔Cy3。回收后至少可以重复使用10次。
      需使用可以观察红色荧光和蓝色荧光的荧光显微镜。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 对于贴壁细胞： 
a. 吸除培养液，用PBS洗涤1次。 
b. 加入固定液，固定5-15分钟。固定液的用量充分盖住样品即可，对于6孔板中的样品，通常加入1ml固定液。 
c. 吸除固定液，用洗涤液洗涤3次，每次3-5分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。
d. 加入免疫染色封闭液，室温封闭1小时。免疫染色封闭液的用量充分盖住样品即可，对于6孔板中的样品，通常加入1ml免疫染色封闭液。 
e. 吸除免疫染色封闭液，加入NF-κB p65抗体，室温孵育1小时或4℃孵育过夜。 
f. 小心吸出NF-κB p65抗体到适当的容器内，4℃保存，留做下次使用。 
g. 洗涤液洗涤3次，每次5-10分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。 
h. 加入抗兔Cy3，室温孵育1小时。抗兔Cy3的用量充分盖住样品即可，对于6孔板中的样品，通常加入1ml抗兔Cy3。 
i. 小心吸出抗兔Cy3到适当的容器内，4℃保存，留做下次使用。 
j. 洗涤液洗涤2次，每次5-10分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。 
k. 加入细胞核染色液(DAPI)，室温染色5分钟左右。细胞核染色液的用量充分盖住样品即可，对于6孔板中的样品，通常加入1ml细胞核染色液。 
l. 吸除细胞核染色液，用洗涤液洗涤3次，每次3-5分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。 
m. 滴加适当量的抗荧光淬灭封片液，盖玻片封片后荧光显微镜下观察。NF-κB的染色为红色荧光，细胞核的DAPI染色为蓝色荧光。 
2. 对于悬浮细胞： 
a. 离心收集细胞，PBS洗涤1次。吸尽PBS后把细胞适当弹散。 
b. 加入固定液，轻轻悬浮细胞，固定5-15分钟。 
c. 离心，去除固定液。 
d. 加入洗涤液洗涤1次。 
e. 取少许洗涤液重悬细胞，滴加到盖玻片或载玻片上，做成涂片。充分晾干后继续后续操作。 
f. 洗涤液洗涤2次，每次5分钟。每次洗涤时须尽量吸尽残余液体，同时要保持样品表面有些湿润，不能干掉，最后一遍洗涤完时吸尽洗涤液。 
g. 转1.d。后续步骤同1.d起的步骤。 
3. 对于组织切片： 
a. 对于石蜡切片先进行常规的脱蜡和水化处理，对于冷冻切片可以直接进行后续步骤。 
b. 转1.b。后续步骤同1.b起的步骤。