Protein A Agarose (Fast Flow,

本Protein A Agarose (Fast Flow，抗体纯化用)即快流速Protein A琼脂糖凝胶，主要用于抗体的纯化。
本产品不建议用于免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)和免疫共沉淀(Co-IP)。对于免疫沉淀或免疫共沉淀，请选用再康生物的
P2006 Protein A Agarose (Fast Flow, 进口分装)或P2051 Protein A Agarose (Fast Flow, for IP)。
Protein A是一种发现于金 黄 色 葡 萄 球 菌(Staphylococcus aureus)的细胞壁表面蛋白，分子量为42kDa；Protein G是C型或G型链球菌(Streptococcal bacteria)表达的免疫球蛋白结合蛋白。Protein A和Protein G功能相似，能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)结合，结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc区，但有资料显示Protein A也会和人VH3家族的Fab区结合，而Protein G有时与Fab区也有一定结合。同时，两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的Protein A、G与琼脂糖凝胶(agarose)以一定的方式结合，可用于抗体的纯化。
Protein A Agarose适合于纯化human IgG₁、IgG₂、IgG₄，mouse IgG_2a、IgG_2b及rabbit IgG等。下表是再康生物Protein A、Protein G、Protein A+G Agarose产品与人、小鼠、大鼠常见的免疫球蛋白亚类的结合能力及不同物种的总结合能力情况表。

本产品中的重组Protein A可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合，分子量为34.8kDa。该重组Protein A通过改造，仅保留了与IgG Fc端结合相关的氨基酸序列，去除了结合位点以外可能导致非特异性结合的序列，从而可以有效减少非特异性结合。每个Protein A分子可以结合5个IgG分子。
本产品中的Protein A共价连接到4%的高交联度、高流速琼脂糖(cross-linked, 4% Agarose, Fast Flow)上。每毫升Protein A agarose beads (沉淀物)中共偶联有约4mg的重组Protein A。每毫升Protein A agarose beads (沉淀物)可以结合约30-50mg human IgG。本产品中agarose beads的平均直径为90μm，蛋白纯化时的推荐线性流速为50-400cm/h，耐压指数为0.008MPa。
本产品配制在可以直接用于抗体纯化的适当溶液中，每毫升中共含有0.25ml agarose beads (沉淀物)。
包装清单：

保存条件：
4℃保存，一年有效。请勿冷冻。
注意事项： 
请勿冷冻保存本产品。
Protein A Agarose使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。
本产品含有微量的防腐剂，不会影响常规的抗体纯化。
从蛋白样品收集开始，所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 抗体纯化：
a. 准备工作：
(a) 用0.45微米或0.2微米孔径的滤膜过滤所用的溶液。
(b) 所有的溶液必须用超声等方法脱气(degas)。
(c) 选择适当的纯化柱，用适当量的Protein A Agarose装填纯化柱。也可使用再康生物的预装柱产品(P2024、P2025)。
(d) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤并平衡纯化柱，流速可以用恒流泵控制为1ml/min (1ml预装柱)。如无恒流泵，也可以完全依靠重力洗涤并平衡纯化柱。
b. 抗体纯化：
(a) 把含有待纯化的抗体上样到纯化柱。
(b) 待纯化的抗体过柱后，用10-20倍柱体积的TBS洗涤，以去除未结合和非特异性结合的蛋白。洗涤是否完全可以通过测定280nm的吸光度进行确定。
(c) 洗涤完后，用10ml 50mM glycine，pH2.7作为洗脱液，洗脱结合的抗体。某些抗体和Protein A的结合能力很强，在pH2.7时洗脱效果不太理想，可以使用50mM glycine，pH1.9作为洗脱液。分管收集洗脱下的抗体，根据蛋白浓度或后续的检测效果确定洗脱峰在哪几个收集管中。
c. 纯化柱的再生：
(a) 用10-20倍柱体积的TBS洗涤纯化柱，使纯化柱达到中性的pH。
(b) 用TBS来保存再生的纯化柱。