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文献和实验实验室检测和快速诊断的标准如《GB/T 19438.1-2004禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.2-2004 H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》、《GB/T 19438.3-2004 H7亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》等。以上实时荧光定量PCR技术在禽流感检测方面的国家标准是该技术在当前的人感染猪流感诊断中应用的基础和前提。实时荧光定量PCR技术及在我国卫生应急中的应用要求实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative
定量的方法。 实时荧光定量 PCR 是目前确定样品中 DNA(或 cDNA) 拷贝数最敏感、最准确的方法。如果用于 RNA 检测,这被称为逆转录实时 PCR 即(Real-time RT-PCR)是实时 PCR 法,它是指对 DNA 或经过反转录(RT-PCR)的 RNA 通过聚合酶链式反应并实时监测 DNA 的放大过程,在扩增的指数增长期就测量扩增产物,因为扩增指数增长期测量值与特异 DNA(RNA)起始量存在相关性,从而实现定量检测。 RealTime PCR 的基本目标是精确
可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术(分子信标技术,以美国人Tagyi为代表)、 TaqMan探针(以美国ABI公司为代表)和FRET技术(以罗氏公司为代表)等;荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料,非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ;饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。 嵌合荧光染料法(SYBR GreenⅠ)SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料,与双链DNA非特异性结合。在游离
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