50% PEG3350溶液

50% PEG3350溶液

产品简介

   再康生物出品的经典酵母转化试剂盒主要用于酿酒酵母质粒转化实验，该试剂盒遵循广大用户的使用习惯，分别提供PEG、LiAc和Carrier DNA溶液，PEG、LiAc均经过滤除菌，Carrier DNA经特殊优化处理，更有助于提高质粒DNA的转化效率。该试剂盒可根据实际需要灵活配制1 × LiAc溶液和转化预混液，既方便使用，又经济实惠。

感受态细胞制备：

1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA培养基平板上划线，30 ℃培养2-4天。

2.挑取酵母单菌落在YPDA培养基平板上划3-5 mm的短线，30 ℃培养2-4天。

3.待酵母单菌落长至直径2 mm时，把酵母细胞接种到3 mL YPDA液体培养基中，30 ℃过夜培养。

4.第二天转接到含有30-50 mL YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养，待OD600达到0.4-0.5，3000 rpm离心5 min，弃上清。

5.沉淀用30-50 mL的无菌的去离子水悬浮。3000 rpm离心5 min，弃上清。

6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc（150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL无菌水）重悬后转移至1.5 mL离心管中，3000 rpm离心5 min，弃上清。

注意：10 × LiAc Solution经过pH缓冲，无需添加TE作为缓冲剂。

7.加入1 mL 1 × LiAc重悬，小体积转化按照每管100 μL分装，用于文库转化不分装。

8.3000 rpm离心5 min，弃上清，感受态细胞即制备完毕。

注意：制备好的感受态最好立即使用，在第8步离心前，室温放置不应超过5小时。

转化预混液配制：

 

酵母质粒转化：

1.将360 μL预混液加入1支感受态细胞中，反复吹吸沉淀，使酵母细胞彻底悬浮于预混液中。

2.30 ℃的水浴锅中孵育30 min，每10 min混匀一次。

3.（加入20 μL DMSO，可选）42 ℃的水浴锅中热击30 min，每10 min混匀一次。

4.12000 rpm离心15 s，弃上清液。

5.（可选步骤）用1 mL YPD Plus Liquid Medium重新悬浮，30℃摇床震荡培养30-60 min。12000 rpm离心15 s，弃上清液。

6.加入0.1-1 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬沉淀，涂筛选培养基平板，30 ℃培养2-4天。

酵母文库转化：（需用15-50 mL离心管）

1. 将2520 μL预混液加入到感受态细胞（未分装）沉淀中，震荡使感受态细胞充分重悬。

2. 放置在30 ℃的水浴锅中孵育50 min，每10 min混匀一次。

3.（加入160 μL DMSO，可选）放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min，每10 min混匀一次。

4. 3000 rpm离心5 min，弃上清液。

5.（可选步骤）用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀，30 ℃摇床震荡培养90 min，3000 rpm离心5min，弃上清液。

6.加入15 mL无菌去离子水或0.9% 氯化钠溶液重悬菌体，涂筛选培养基平板（50个平板左右），30 ℃培养2-4天。

注意事项：

1.转化全程需无菌操作。

2.初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后-20℃储存备用。下次使用前在冰上解冻Carrier DNA。反复冻融3-5次后需重新变性Carrier DNA。

3.PEG溶液在低温环境下会析出，请于常温环境下完全溶解后使用。

4. 根据质粒浓度增减体积，增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！