Clara® Probe 一步法预混液 AquaPlex

​产品描述​

Clara® Probe 一步法预混液和一步法紫色预混液确保RT-qPCR检测不再具有挑战性。这款新型单管RT-qPCR预混液适用于基于探针的RNA和DNA靶标的单重及多重检测。

这种经过精心优化的4x浓度RT-qPCR预混液将最高的灵敏度与易用性相结合，可简化RT-qPCR工作流程。因此，该预混液在扩增DNA或RNA时均无效率损失，非常适合于需要检测两种类型靶标但无需分别使用不同qPCR试剂的用户。该产品还提供无色和紫色两种规格，便于肉眼观察预混液体系。如需用于粗提唾液或血液样本并具有广谱抑制剂耐受性，请尝试我们的Clara® 耐抑制剂探针一步法预混液。

​概述​

​探针法一步法qPCR预混液 – 结果清晰，结论可靠​

Clara® Probe 一步法预混液能够在诊断应用和基础研究中实现具有最高灵敏度、可靠性且最易用的qPCR和一步法RT-qPCR。它是一种通用的qPCR预混液，适用于所有类型的探针技术，包括TaqMan探针、Scorpions探针和分子信标。这是我们第一代"all-in-one"一步法RT-qPCR预混液，其中DNA聚合酶和逆转录酶均包含在同一预混液中。Clara® Probe 一步法预混液采用我们独特的热启动Taq DNA聚合酶和经过特殊修饰的高性能、耐热UltraScript® 逆转录酶。开发过程中的严格测试使该预混液高度适用于单重和多重检测，无论您检测单个靶标还是同时检测多个靶标，都能实现高效率和灵敏的检测。

该预混液也适用于熔解曲线分析（仅限杂交探针），并可提供不含被动参比染料（无ROX），或含低ROX、高ROX、独立ROX以及AquaPlex配方。请使用我们的qPCR选择工具来查找与您的仪器兼容的ROX变体。

AquaPlex配方设计采用适用于红色（Cy5, 650 nm）检测通道的被动参比染料，从而能够在通常用于ROX检测的通道中使用探针染料进行监测。这使得在多重检测中能产生更优化的信号和更高质量的数据。

​特点​

1. 4x浓缩预混液形式，适用于高通量、高度多重检测

2. 对RNA和DNA靶标进行超灵敏检测

3. 可早期检测各种范围的模板量

4. 含有经过修饰的UltraScript® 逆转录酶，为单管形式

5. 高级RNase抑制剂

6. 抗体介导的热启动技术

7. 兼容所有实时荧光定量PCR平台 – 标准和快速循环条件

8. 提供含惰性紫色染料的规格，便于加样时肉眼观察

​应用​

1. 基因表达分析

2. 基因分型

3. 等位基因分辨

4. 体外诊断试剂盒开发

5. 单重及多重RNA和DNA检测

​图1. 小鼠RNA的单重检测灵敏度​

使用Clara® Probe 一步法预混液对常见内参基因（β-肌动蛋白和β-2-微球蛋白[B2M]）进行单重检测的扩增曲线。使用5个连续稀释的小鼠总RNA模板（浓度对应50 ng/µL, 5 ng/µL, 500 pg/µL, 50 pg/µL, 和5 pg/µL）。总反应体积为20 µL。循环条件为：52 °C 5分钟，95 °C 3分钟，然后60个循环的95 °C 15秒，60 °C 30秒。即使在低模板浓度下，Clara® Probe 一步法预混液也显示出高灵敏度和可重复的扩增，并具有最大效率。

Singleplex sensitivity with mouse RNA.
Amplification of common house-keeping genes (β-Actin and β-2-Microglobulin [B2M]) in singleplex setup using Clara® Probe 1-Step Mix. Amplification curves are shown in the left panels and efficiency in the right panels. 5 serial dilutions of mouse total RNA template were used, corresponding to 50 ng/µL, 5 ng/µL, 500 pg/µL, 50 pg/µL, and 5 pg/µL. The total reaction volume was 20 µL. Cycle conditions were 52 °C 5 min, 95 °C 3 min and 60 cycles of 95 °C 15 s, 60 °C 30 s. Clara® Probe 1-Step Mix shows high sensitivity and reproducible amplification even at low template concentrations with optimal efficiency.

​图2. 小鼠cDNA的单重检测灵敏度​

使用Clara® Probe 一步法预混液对常见内参基因（β-2-微球蛋白[B2M]）进行单重检测的扩增曲线。使用5个连续稀释的小鼠cDNA模板（浓度对应1 ng/µL, 100 pg/µL, 10 pg/µL, 1 pg/µL, 和0.1 pg/µL [针对B2M]）。总反应体积为20 µL。循环条件为：95 °C 2分钟，然后60个循环的95 °C 10秒，60 °C 30秒。即使在低模板浓度下，Clara® Probe 一步法预混液对DNA靶标也显示出高灵敏度、可重复的扩增以及最佳效率。

Singleplex sensitivity with mouse cDNA.
Amplification of common house-keeping genes (β-2-Microglobulin [B2M]), in singleplex setup using Clara® Probe 1-Step Mix. Amplification curves are shown in the left panels and efficiency in the right panels. 5 serial dilutions of mouse cDNA template were used, corresponding to 1 ng/µL, 100 pg/µL, 10 pg/µL, 1 pg/µL, and 0.1 pg/µL (for B2M). The total reaction volume was 20 µL. Cycle conditions were 95 °C 2 min and 60 cycles of 95 °C 10 s, 60 °C 30 s. Clara® Probe 1-Step Mix shows high sensitivity and reproducible amplification even at low template concentrations with optimal efficiency also for DNA targets.

 ​图3. 多重检测中的可靠性能​

使用Clara® Probe 一步法预混液（粉色条）、Thermo Fisher SuperScript III Platinum OneStep qRT-PCR Kit（绿色条）、Thermo Fisher TaqPath 1-Step Multiplex Mastermix（蓝色条）和NEB Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit（黄色条）对常见冬季病毒（甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和SARS-CoV-2）进行多重检测。使用5个连续稀释的RNA模板（浓度对应每种病毒基因组40,000, 4,000, 400, 40, 和4个拷贝）。总反应体积为20 µL。循环条件为：52 °C 15分钟，95 °C 3分钟，然后50个循环的95 °C 15秒，60 °C 30秒。在多重检测中，即使在低拷贝数模板下，Clara® Probe 一步法预混液也显示出高灵敏度、可重复的扩增以及最佳效率，其表现与主要竞争对手的探针法一步法预混液相当或更优。

​Reliable performance in a multiplex setup.
Multiplex amplification of common winter viruses (Influenza A, Influenza B, Respiratory Syncytial Virus, and SARS-CoV-2) using Clara® Probe 1-Step Mix (pink bars), Thermo Fisher SuperScript III Platinum OneStep qRT-PCR Kit (green bars), Thermo Fisher TaqPath 1-Step Multiplex Mastermix (blue bars) and NEB Luna Universal Probe One-Step RT-qPCT Kit (yellow bars). Ct values are shown in the top panels and efficiency in the bottom panels. 5 serial dilutions of RNA template were used, corresponding to 40 000, 4 000, 400, 40, and 4 copies of each viral genome. The total reaction volume was 20 µL. Cycle conditions were 52 °C 15 min, 95 °C 3 min and 50 cycles of 95 °C 15 s, 60 °C 30 s.
Clara® Probe 1-Step Mix shows high sensitivity and reproducible amplification even at low copy number templates with optimal efficiency in a multiplex setup, in line or better than the major Probe 1-Step mix competitors.