ROCHE/罗氏 6402712001 FastStart

ROCHE / 罗氏 6402712001 FastStart SYBR Green 预混剂（FastStart Essential DNA Green Master）产品介绍

一、基础产品信息

1. 核心标识与规格

• 货号：6402712001
• 产品全称：FastStart Essential DNA Green Master（FastStart SYBR Green 预混剂）
• 适用仪器：专为罗氏 LightCycler® 系列仪器 设计，适配 LightCycler® Pro、LightCycler® 96 仪器，支持 8 联管或多孔板（如 LightCycler® 480 多孔板）反应体系，不适用于非罗氏品牌 qPCR 仪
• 产品形态：2× 浓度即用型预混剂，无需额外混合基础组分，仅需添加模板、引物即可配置反应体系，简化实验操作流程

2. 产品定位与核心用途

二、核心技术与优势

1. 热启动技术：提升特异性与灵敏度

• 室温钝化：75℃以下无酶活性，可避免室温试剂配置阶段（如引物与模板非特异性结合）引发的无效延伸，显著减少引物二聚体、非特异性扩增产物的生成；
• 高温激活：仅需在 PCR 预孵育步骤（95℃，5-10 分钟）即可通过去除封闭基团完全激活酶活性，无需额外操作（如抗体介导热启动的离心、孵育步骤），简化实验流程；
• 文献支撑：热启动技术已被多篇研究证实可提升 PCR 特异性与灵敏度（参考 Chou, Q. et al., 1992；Kellogg, D. E. et al., 1994 等文献），该酶的修饰设计进一步强化了这一优势。

2. SYBR Green I 染料检测：精准定量与便捷分析

• 检测原理：预混剂中内置 SYBR Green I 双链 DNA 特异性染料，未结合 DNA 时荧光信号微弱（背景低），结合双链扩增产物后荧光信号呈指数级增强，通过实时监测荧光强度变化，可实现对靶标 DNA 的定量分析；
• 熔解曲线兼容：支持扩增后熔解曲线分析，可通过特异性熔解温度（Tm 值）验证扩增产物纯度，排除非特异性产物干扰，弥补 SYBR Green I 染料 “非靶标依赖结合” 的潜在缺陷。

3. 性能稳定性：适配复杂靶标与仪器

• 宽靶标适配：可扩增长达 500 bp 的 DNA/cDNA 片段，对富含 GC 或 AT 的高难度模板（如 GC 含量＞60%、AT 含量＞70% 的基因片段）仍有稳定扩增效果，无需额外添加 DMSO、甜菜碱等助扩增试剂；
• 仪器适配优化：针对 LightCycler® 系列仪器的温控系统、光学检测模块进行配方优化，确保在 8 联管或多孔板中实现均一的反应效率，减少孔间差异，提升数据重复性；
• 防污染设计：部分批次含 dUTP（脱氧尿苷三磷酸），可与尿嘧啶 - DNA 糖基化酶（UDG）配合使用，降解前次 PCR 残留的含尿嘧啶产物，降低交叉污染导致的假阳性风险（需参考具体批次说明书确认 dUTP 含量）。

三、产品组分与质量控制

1. 核心组分（2× 预混剂含以下关键成分）

2. 严格质量控制

• 富含 GC 模板：验证高 GC 片段扩增效率；
• 富含 AT 模板：验证低复杂度序列扩增特异性；
• 长片段模板（约 440 bp）：验证酶的持续延伸能力；
• 功能指标：荧光信号强度、Ct 值重复性、熔解曲线单一性均需符合罗氏内部质量标准，方可出厂。

四、使用建议与注意事项

1. 适用实验场景与流程

• 核心应用：SYBR Green I 染料法 qPCR（如基因表达定量、病原体载量检测）、两步法 RT-qPCR（需与罗氏 Transcriptor First Strand cDNA 合成试剂盒联用，先将 RNA 逆转录为 cDNA，再进行 qPCR）；
• 反应体系配置示例（以 20 μL 体系为例）：
   
  10 μL 2× FastStart Essential DNA Green Master + 1-2 μL 引物混合物（终浓度 0.1-1.0 μM） + 1-10 ng cDNA/10-100 ng 基因组 DNA + 无酶水补至 20 μL；
• 典型反应程序：
   
  预变性（激活酶）：95℃ 5-10 分钟 → 40 个循环（变性：95℃ 15 秒；退火延伸：60℃ 1 分钟，同时采集荧光） → 熔解曲线分析（60℃→95℃，缓慢升温并监测荧光变化）。

2. 操作与储存注意事项

• 储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（建议分装为单次用量，减少冻融次数），短期（1-2 周）可 4℃暂存，不可室温长时间放置；
• 试剂混匀：使用前需上下颠倒轻轻混匀预混剂，避免剧烈振荡产生气泡（气泡会干扰荧光检测，需短暂离心去除）；
• 引物与模板优化：引物浓度建议以 0.2 μM 为起始浓度（可在 0.1-1.0 μM 范围内优化），模板量以 1-10 ng cDNA 或 10-100 ng 基因组 DNA 为宜，避免模板过量导致非特异性扩增；
• 仪器限制：仅适配 LightCycler® Pro、LightCycler® 96 等罗氏专用 qPCR 仪，不可用于 Applied Biosystems、Bio-Rad 等非罗氏品牌仪器（非适配仪器的光学参数、温控速率与试剂配方不匹配，会导致数据偏差）。